Die Beurteilung Signaling Eigenschaften von ektodermale Epithel Während Craniofacial Entwicklung

Summary

Dieser Artikel beschreibt ein Gewebetransplantation Technik, die entwickelt, um die Signal-und Strukturierungs-Eigenschaften der Oberfläche cephalica Ektoderm während kraniofazialen Entwicklung Test war.

Abstract

Die Zugänglichkeit der Vogelembryonen hat dazu beigetragen, experimentelle Embryologie verstehen das Schicksal der Zellen während der Entwicklung und der Rolle der Gewebe-Wechselwirkungen, die Strukturierung und Morphogenese von Wirbeltieren (z. B. ^{1, 2, 3, 4)} zu regulieren. Hier zeigen wir eine Methode, die diese Zugänglichkeit nutzt die Signalisierungs-und Strukturierungs-Eigenschaften der ektodermalen Gewebe während Gesichts-Entwicklung zu testen. In diesen Experimenten, schaffen wir Wachtel-Küken ⁵ oder Maus-chick ⁶ Chimären durch Transplantation der Oberfläche cephalica Ektoderm, dass der Oberkiefer von Wachteln oder Maus deckt entweder auf der gleichen Region oder einer ektopischen Region Hühnerembryonen. Die Verwendung von Wachteln als Spendergewebe zur Transplantation in chicks wurde entwickelt, um die Vorteile eines nucleolar Marker in Wachteln, aber nicht chick Zellen tragen, sodass Ermittler zu hosten und zu Spendergewebe ⁷ unterscheiden. Ebenso ist eine sich wiederholende Element in der Maus-Genom und ist ubiquitär exprimiert, das uns erlaubt, Host-und Spendergewebe in Maus-chick Chimären ⁸ unterscheiden. Die Verwendung von Maus Ektoderm als Spendergewebe wird erheblich erweitern unser Verständnis dieser Gewebe-Wechselwirkungen, denn dies wird es uns ermöglichen, die Signalisierung Eigenschaften des Ektoderms aus verschiedenen mutierten Embryonen zu testen.

Protocol

1. Vorbereiten des Spendergewebe

1. Bereiten Kulturmedien, schärfen Glas Stifte, schärfen Wolfram Nadeln.
2. Sammeln Embryo aus der Schale, in eiskaltem PBS waschen.
   1. Mit einer 10 ml-Spritze und eine 18-Gauge-Nadel entfernen 1,0 ml Albumin aus dem spitzen Ende der Eierschale.
   2. Machen Sie ein kleines Loch an der Oberseite des Gehäuses mit dem Punkt der Schere, und schneiden Sie dann eine kreisrunde Öffnung, um den Embryo aussetzen
3. Entfernen Sie den Kopf und Ort in DMEM (serumfreien, Raumtemperatur)
4. Dissect frontonasale Prozess aus dem Embryo (oder anderer Geber vor Ort wie Ober-oder Unterkief....

Discussion

Mit dieser Transplantation Methode konnten wir feststellen, dass die Ektoderm Signalisierung Informationen, die dorsoventrale Polarität und proximodistalen Erweiterung des Oberkiefers regelt enthält. Die Ähnlichkeit der Ergebnisse bei der Verwendung von Wachteln oder Maus Ektoderm, und die Erhaltung der molekularen Signale in diesem Gewebe unter vielen Arten ^6,11 bedeutet, dass eine hoch konservierte Signalisierung Zentrum unter den Wirbeltieren ist. Darüber hinaus haben andere Forscher ähnliche Techniken ver.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Tektronix, Inc.
DMEM	University of California - San Francisco	CCFDA003
BSA	Sigma-Aldrich	A7906
Dispase	GIBCO, von Life Technologies	17105-041
35x10 mm Petrischale	Falcon BD	1008
Nr. 5 Dumont Pinzette	Fine Science Tools	11252-20
Schere	Fine Science Tools	14058-11
Federschere	Fine Science Tools	15010-11
Nadelhalter	Fine Science Tools	26016-12
Wolframnadel	Fine Science Tools	26000
Mikrokapillarrohr	Drummond Scientific	3-000-225-G
Pasteur	Pipets Fisher Scientific	13-678-6B
Federschere	Fine Science Tools	15010-11
Klingenhalter	Fine Science Tools	10052-11
Rasierklinge	Fine Science Tools	10050-00