Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Kopfposten-Implantationschirurgie
HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass sterile Instrumente verwendet werden, und arrangieren Sie Operation und Genesung in verschiedenen Zonen. Sobald die Implantation gemeistert ist, dauert sie etwa 30 Minuten.
- Zur Analgesie 30 Minuten vor Beginn der Operation subkutan Buprenorphin (0,05 mg/kg) injizieren und das Tier wieder in seinen Heimatkäfig setzen.
Anmerkung: Die analgetische Wirkung von Buprenorphin hält etwa 12 Stunden an, lange nach dem Ende des Eingriffs. Nach unserer Erfahrung zeigen Mäuse keine Anzeichen von Stress im Zusammenhang mit diesem Eingriff, aber eine nachfolgende Dosis von 0,05 mg/kg Buprenorphin wird 24 Stunden nach der Operation empfohlen.
- Betäuben Sie das Tier in einer Kammer mit 2,5 % bis 3 % Isoflurangas. Warten Sie 3 Minuten und überprüfen Sie, ob die Maus richtig betäubt ist, indem Sie die Atmung und den Bewegungsmangel in der Kammer beobachten. Führen Sie die Maus mit einem Heizkissen an einen Nasenkonus auf einem Operationstisch und stellen Sie durch interdigitales Kneifen sicher, dass kein Entzugsreflex vorhanden ist, und senken Sie das Isofluran auf 1,5 %.
- Rasieren Sie den Kopf der Maus mit einem Elektrorasierer. Um eine sterile Umgebung zu erhalten, reiben Sie die rasierte Stelle mit Jodlösung und anschließend mit 70% Alkohol ein. Wiederholen Sie diesen Vorgang noch zwei weitere Male.
- Injizieren Sie Lidocainhydrochlorid (2%, 2 mg/kg) zur Lokalanästhesie unter die Haut des Kopfes und warten Sie 5 Minuten, bis die Wirkung einsetzt. Um Augenschäden durch Trockenheit zu vermeiden, bedecken Sie die Augen der Maus mit topischer Augensalbe für Tierärzte.
- Fassen Sie mit einer stumpfen Pinzette die Haut am Hinterkopf und machen Sie mit einer stumpfen Schere (oder einem Skalpell) einen Längsschnitt von etwa 1,5 cm, um den Schädel freizulegen.
- Kratzen Sie mit Hilfe eines Skalpells das Periost ein. Achten Sie darauf, nicht zu stark zu kratzen, da die Fixierung der Kopfstütze beeinträchtigt werden kann, wenn der Schädel leicht zu bluten beginnt.
- Tragen Sie einen Tropfen des grünen Aktivators (siehe Materialtabelle) auf die Mitte des Schädels auf. Dadurch wird die Fixierung des Zements verbessert, indem die Knochenpermeabilität erhöht wird.
- Bereiten Sie den Zement vor: Mischen Sie einen Löffel (siehe Materialtabelle) Polymer mit fünf Tropfen Monomer und einem Tropfen Katalysator. Tragen Sie mit Hilfe eines Pinsels eine großzügige Menge der Zementmischung zwischen den Lambda- und Bregma-Schädelmarken auf.
- Platzieren Sie den Kopfpfosten schnell auf dem Zement mit einer Wischbewegung, die von Lambda zu Bregma wechselt. Nachdem die Kopfstütze platziert wurde, tragen Sie erneut mehr Zement um den unteren Teil auf, um sicherzustellen, dass die Kopfstütze richtig am Schädel haftet. Um eine korrekte Fixierung zu gewährleisten, stellen Sie sicher, dass der Zement reichlich aufgetragen wird und trocknet, bevor Sie mit dem nächsten Schritt fortfahren.
Anmerkung: Bei diesem Fixierungsverfahren löst sich der Kopfpfosten nicht ab und ermöglicht langfristige, wiederholte Tests. In unseren Händen beträgt die Entfernung der Kopfstütze <10 %.
- Bereiten Sie die Harzmischung vor, indem Sie ein Pulver-Flüssig-Verhältnis anwenden, das eine glatte Konsistenz der Mischung ermöglicht. Tragen Sie das Harz dort auf, wo der Zement aufgetragen wurde, sowie um den Kopfpfosten herum, um seine Oberfläche zu schützen.
- Warten Sie 3 Minuten, bis das Harz getrocknet ist, und schließen Sie die Haut an der Rückseite der Ohren mit einer monofilen Naht. Tragen Sie mit einem Wattestäbchen verdünnte (10%–20%) Jodlösung auf die operierte Stelle auf.
Anmerkung: Achten Sie darauf, dass die Haut nicht am Harz kleben bleibt.
- Schalten Sie die Anästhesie aus und setzen Sie das Tier unter rotes, warmes Licht, um eine Unterkühlung zu vermeiden. Lege angefeuchtetes Futter und Hydrogel oder eine andere Wasserquelle auf Gelbasis in den Boden des Käfigs. Lassen Sie die Maus nicht unbeaufsichtigt, bis sie wieder zu Bewusstsein kommt. Sobald sich das Tier vollständig von dem Eingriff erholt hat (in der Regel 30 Minuten bis 1 Stunde danach), setzen Sie es in einen Käfig mit Gruppen von drei oder vier Personen, um soziale Interaktionen zu fördern.
