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Alle Verfahren, die Tiere betreffen, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Intraperitoneale Injektion von Zellen
HINWEIS: In unseren Experimenten werden Mäuse in einer laminaren Luftströmungs- oder Biosicherheitswerkbank innerhalb unserer Barriereanlage behandelt, um das Risiko einer Exposition gegenüber Krankheitserregern zu begrenzen. Um diese Technik anschaulich zu veranschaulichen, wurden die Verfahren im begleitenden Video in einem für die Tierarbeit zugelassenen Labor durchgeführt. Bei dieser speziellen Technik müssen die Tiere nicht unter Narkose stehen. Führen Sie diese Technik gemäß den genehmigten Protokollen an lebenden Tieren durch. Verwenden Sie für diese Studie geeignete Mäusestämme. Zum Beispiel: Verwenden Sie immungeschwächte, athyme Nacktmäuse für die Untersuchung der Besiedlung menschlicher Eierstockkrebszellen (SKOV3ip.1 und HeyA8); immunkompetente C57BL/6-Mäuse zur Untersuchung der Besiedlung von Eierstockkrebszellen (ID8) der Maus verwenden.
- Geben Sie 500 μl Einzelzellsuspension von Eierstockkrebszellen in eine Spritze und geben Sie sie in die sterile 25-G-Nadel mit Verschluss. Dies reduziert die Zellscherung vor der Injektion.
- Heben Sie die Maus am Nacken auf und halten Sie den Schwanz mit der Handfläche und dem Zeigefinger fest und fixieren Sie das linke Hinterbein zwischen Ring- und kleinem Finger (wenn die Maus mit der linken Hand festgehalten wird).
HINWEIS: Um eine Traumatisierung der Bauchorgane zu vermeiden, halten Sie die Maus gut fest, damit sie sich während der Injektion nicht bewegen kann.
- Stellen Sie sich eine Linie quer über den Bauch knapp über den Knien vor und lokalisieren Sie einen Punkt auf der rechten Seite des Tieres und in der Nähe der Mittellinie. Der Eintrittspunkt befindet sich kranial zur letzten Brustwarze und leicht medial der letzten Brustwarze.
Anmerkung: Das Einstechen der Nadel auf der rechten Seite der Maus vermeidet den Blinddarm und verringert das Risiko, den Darm zu punktieren.
- Führen Sie die Nadel im unteren lateralen Bereich des Bauches der Maus bis zu einer Tiefe von ca. 0,5 cm ein. Ziehen Sie den Kolben zurück, um sicherzustellen, dass die Nadel nicht in ein Blutgefäß oder andere Bauchfellorgane eingedrungen ist.
- Wenn Flüssigkeit abgesaugt wird, verwerfen Sie die Spritze (und die Probe). Ein grünlich-braunes oder gelbes Aspirat deutet auf das Eindringen der Nadel in den Darm bzw. die Blase hin.
- Injizieren Sie die Probe mit langsamem, gleichmäßigem Druck. Ziehen Sie die Nadel heraus und setzen Sie die Maus wieder in ihren Käfig ein. Verschließen Sie die Spritze nicht, bevor Sie sie in einem scharfen Behälter entsorgen.
- Opfern Sie Mäuse durch CO2 -Erstickung und Entnahme lebenswichtiger Organe zu einem bestimmten Zeitpunkt nach der Injektion.