Entnahme von Peritonealfettdepots: Eine Technik zur Untersuchung der Besiedlung von Peritonealfettgewebe mit Eierstockkrebs in Mausmodellen

Zusammenfassung

Quelle: Krishnan, V. et al. In Vivo und ex vivo Ansätze zur Untersuchung der metastasierenden Besiedlung von Milchfleckenstrukturen bei Eierstockkrebs im Peritonealfettgewebe. J. Vis. Exp. (2015)

In diesem Video verwenden wir ein euthanasiertes weibliches Mausmodell mit Eierstockkrebs. Anschließend beschreiben wir ein Protokoll zur Identifizierung und Extraktion von Fettdepots oder Fettgeweben, die mit den fünf primären Peritonealorganen assoziiert sind, um die Besiedlung von metastasierenden Krebszellen zu untersuchen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Vorbereitung von Tieren für experimentelle Studien

1. Ermöglichen Sie den Tieren, sich an eine neue Haltung und Umgebung zu gewöhnen, um sich von möglichen physiologischen Auswirkungen des Transports und der Handhabung zu erholen.
   Anmerkung: Die folgende Technik ist auf alle kommerziell erhältlichen Mäusestämme anwendbar. Die Anzahl der Tiere, die für einen Versuch verwendet werden sollen, hängt vom Studiendesign ab und sollte in Absprache mit einem Statistiker erfolgen.

>2. Identifizierung und Isolierung von Peritonealfettdepots

1. Euthanasieren Sie Tiere durch eine CO₂ -Überdosis und eine sekundäre physikalische Methode zur Bestätigung des Todes.
2. Da es sich bei der Entnahme von Peritonealfettdepots um eine Entnahme innerer Organe handelt (sekundäre Methode), ist ein Mittellinienschnitt in der Nähe der Leistenpapillen durch die Peritonealwand vorzunehmen, um die inneren Organe freizulegen (Abbildung 1A).
3. Für das omentale Fett (OM) legen Sie den omentalen/pankreatischen Komplex frei, indem Sie die Milz mit einer Pinzette aus der Bauchhöhle verlängern (Abbildung 1C). Lösen Sie das Omentum aus der Bauchspeicheldrüse und der Milz, indem Sie alle Gewebeverbindungen eng beschneiden. Stellen Sie sicher, dass das verbleibende Bauchspeicheldrüsengewebe herausgeschnitten wird.
4. Verwenden Sie für das Gonadenfett (GF) eine Pinzette, um das Gonadenfett, das die Eierstöcke umgibt, anzuheben, und exzitieren Sie, indem Sie die Gewebeverbindungen durchtrennen (Abbildung 1A oben rechts).
5. Verwenden Sie für das Uterusfett (UF) eine Pinzette, um das Uterusfett um die Gebärmutterhörner herum anzuheben, und entfernen Sie es, indem Sie Gewebeverbindungen durchtrennen (Abbildung 1A unten rechts).
6. Für das Mesenterialfett (MF) schneiden Sie die Verbindung zwischen dem Dünndarm und dem Pylorus ab. Fassen Sie das freie Ende des Dünndarms mit einer Pinzette fest und "schälen" Sie es langsam vom Mesenterialfett ab. Lösen Sie das Mesenterialfett mit einer Präparierschere aus der Mesenterialwurzel (Abbildung 1A unten links).
7. Für das Milzdrüsenfett (SF) heben Sie das distale Ende der Milz mit einer Pinzette an, um das dünne Fettband freizulegen, das das Hilum der Milz mit der Bauchspeicheldrüse verbindet. Entfernen Sie das Milnoportalfett, indem Sie es zuerst aus der Bauchspeicheldrüse lösen und dann vorsichtig aus der Milz präparieren (Abbildung 1B).

Ergebnisse

Abbildung 1. Die relativen Lagen und Strukturen der wichtigsten peritonealen Fettdepots. (ein)Grobanatomische Dissektion, die die relative Lage von vier der fünf primären Quellen für Peritonealfett zeigt. Dargestellt sind das Omentum (OM; umrissen), das Gonadenfett (GF), das Uterusfett (UF), das Mesenterium (MY), der Eierstock (ov), die Gebärmutterhörner (uh) und der Dünndarm (si)....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

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Sezierwerkzeuge	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Na
Pbs	Corning	21-040-CV	Ohne Calcium und Magnesium