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Alle Verfahren, die Tiere betreffen, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Die Dissektion des Urogenitalsystems (UGS)
HINWEIS: Der Schaltplan ist in Abbildung 1 dargestellt.
- Euthanasieren Sie eine 3 Monate alte männliche C57BL/6-Maus mit der inhalativen CO 2-Euthanasiemethode oder einer anderen zugelassenen Technik.
Anmerkung: Mäuse im Alter zwischen 3 und 12 Monaten können erfolgreich für das Experiment eingesetzt werden. Ältere Mäuse (> 6 Monaten) haben höchstwahrscheinlich mehr Fett um das UGS, das entfernt werden muss. Die Identifizierung und Trennung der Lappen ist bei Mäusen, die jünger als 3 Monate sind, oft schwierig. Auch andere Stämme können für das Experiment verwendet werden.
- Setzen Sie die Maus auf den Rücken und befestigen Sie die Beine mit Stecknadeln, so dass die Bauchseite des Tieres freiliegt.
- Sprühen Sie 70%iges Ethanol auf den Bauch der Maus und wischen Sie sie sauber.
Anmerkung: Eine Rasur der Bauchhaare vor der Sektion ist nicht erforderlich.
- Heben Sie die Haut zusammen mit der Muskelschicht mit einer mittelstumpfen Pinzette vom Bauch ab und machen Sie mit einer Schere einen umgekehrten Y-förmigen Schnitt am Bauch.
- Machen Sie zunächst mit einer scharfen Schere einen geraden Schnitt von knapp über dem Penis bis zum Brustbein (Abbildung 2a).
- Schneiden Sie von der Basis des Schnitts zu jedem Zeh bis zu den Oberschenkeln (Abbildung 2b). Falten Sie die Haut auf beiden Seiten und unten nach hinten, um den gesamten Bauchbereich zu sehen (Abbildung 2c-e).
Anmerkung: Die Schnittgröße variiert je nach Alter und Größe der Maus. Die Größe des anfänglichen geraden Schnitts kann je nach Größe der Maus zwischen 1,5 und 4 cm liegen.
- Bewege dich über die anderen Organe, um das UGS freizulegen. Heben und bewegen Sie den braun-gelben Darm (Abbildung 2f). Nehmen Sie die Bauchfettpolster (das undurchsichtige weiße Schwammgewebe) mit einer Pinzette auf und schieben Sie sie zur Seite (Abbildung 2g).
Anmerkung: Das UGS umfasst die Samenbläschen, die Harnröhre, die Prostata, den Ductus deferens (Samenleiter) und die Harnblase. Er ist an dem charakteristischen Paar undurchsichtiger weißer Halbkreisbögen (die Samenbläschen) zu erkennen, an denen der flüssigkeitsgefüllte Blasensack befestigt ist. Das durchscheinende Gewebe, das sich direkt unter den Samenbläschen befindet, ist die Prostata.
- Lokalisieren Sie das UGS, halten Sie die Harnblase mit einer stumpfen Pinzette fest und heben Sie das gesamte UGS vom Mausbauch nach oben.
Anmerkung: Wenn die Blase voll ist, entleeren Sie sie zuerst mit einer kleinen Spritze, um einen besseren Halt mit der Pinzette zu ermöglichen und das Risiko eines Blasenrisses zu verringern.
- Ziehen Sie die Blase weiter nach oben, schieben Sie eine Schere unter die Blase und Prostata bis zur Wirbelsäule und machen Sie einen Schnitt. Schneiden Sie alle verbleibenden Verbindungen zur Bauchhöhle durch (Abbildung 2h und 2i). Achten Sie darauf, nicht zu nah am UGS zu schneiden, um ein versehentliches Durchtrennen von Prostatagewebe zu vermeiden.
Anmerkung: Während des Schnitts unter dem UGS sollte die Schere bis zum Rücken der Maus eingeführt werden, so dass der Schnitt auch die Wirbelsäule einrastet. Diese Methode führt dazu, dass fast alle Verbindungen zwischen dem UGS und der Bauchhöhle in einem Schnitt durchtrennt werden, wodurch die Zeit für die Entnahme des Gewebes aus der Maus reduziert wird.
- Entfernen Sie das UGS und legen Sie es in 2-6 ml (genug, um das Gewebe zu bedecken) phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) oder Dulbeccos modifiziertes Eagle-Medium (DMEM, hohe Glukose) in eine 6 cm Petrischale (Abbildung 2j und 2k) und stellen Sie es in ein Seziermikroskop (10-fache Vergrößerung).
Anmerkung: Wechseln Sie das Präpariermedium nach Bedarf in den verbleibenden Schritten.
