Einzelzellprobenahme mittels Mikromanipulation: Eine Technik zur Isolierung einzelner Zellen aus Krebszellsuspension

Abstract

Quelle: Chen S. et al. Zielzell-Voranreicherung und Ganzgenom-Amplifikation für die Downstream-Charakterisierung einzelner Zellen. J. Vis. (2018)

Dieses Video beschreibt die Technik zur Isolierung einzelner Zellen aus einem Pool von Zielzellen, um eine nachgelagerte Analyse durchzuführen. Bei dieser Methode wird ein Mikromanipulator, der an einem Mikroskop angebracht ist, zur hochpräzisen Isolierung einer einzelnen Zielzelle verwendet.

Protocol

>1. Einzelzell-Probenahme

1. Mikromanipulation
   HINWEIS: Um nachgelagerte Anwendungen wie die Gesamtgenomanalyse (WGA) zu ermöglichen, werden isolierte Einzelzellen zu 2 μl Zelllyse-Mastermix hinzugefügt. Bereiten Sie einen Mastermix entsprechend der Anzahl der zu verarbeitenden Zellen vor. Berechnen Sie zusätzliche Volumina für Verluste durch Pipettieren und legen Sie den Zelllyse-Mastermix auf Eis.
   1. Bereiten Sie den Zelllyse-Mastermix vor (Bestandteile des WGA-Kits, Tabelle der Materialien und Reagenzien). Kurz gesagt, mischen Sie 2,0 μl Reaktionspuffer, 1,3 μl Octylphenoxyp....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (1x PBS)	Thermo Fisher Scientific	Tel.: 10010-015
Vacutainer-EDTA- (oder Na-Heparin-) Röhrchen	Bd	366450 (oder 366480)	Wird als Reaktionsgefäß für die ex vivo-Erfassung von Zielzellen verwendet
Pasteurpipetten 150 mm	Volac	Nr. D810	Wird für die Anwendung von Zellen mit geringem Volumen auf den C&R
Fett-Stift	Dako	Nr. 2002	Wird auf Objektträgern verwendet, um die Zellsuspension an Ort und Stelle zu halten
Axiovert M200 ausgestattet mit Mikromanipulator MMJ und CellTram vario	Zeiss/Eppendorf		Verwenden Sie Mikromanipulation zur Hand
Mikrokapillaren (25 μm Durchmesser), CustomTip Typ I	Eppendorf	930001201	Wird zur Mikromanipulation von Zellen verwendet
0,2 mL PCR-Röhrchen	Biozym	Artikel-Nr.: 710920