Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Chirurgischer Eingriff: Röntgentransplantation der Nierenkapsel
- Beobachten Sie die Maus vor der Einleitung der Anästhesie, um Gesundheit und Wohlbefinden zu gewährleisten.
- Platzieren Sie die Maus in der Kammer zur Einleitung einer Isofluran-Anästhesie bei 3-5%. Wenn sich das Tier nicht mehr bewegt und die Atemfrequenz abgenommen hat, wechseln Sie in Bauchlage zum Nasenkonus und halten Sie die Anästhesie bei 1-3%.
- Verwenden Sie bei Bedarf eine Haarschneidemaschine, um die Rückseite der Maus zu rasieren. Dies ist bei der Verwendung von athymischen Nacktmäusen (nu/nu) nicht erforderlich.
- Üben Sie festen Druck auf das Gurtband des ausgestreckten Rückfußes aus, um die Angemessenheit der Anästhesie zu beurteilen. Reagiert die Maus auf Druck, wird mehr Zeit benötigt, bis die Narkose wirkt. Passen Sie bei Bedarf den Anästhesiefluss leicht an, um eine angemessene Anästhesie zu erreichen.
- Wenn die Maus ausreichend betäubt ist, desinfizieren Sie die Operationsstelle mit chirurgischer Jodlösung (Betadin), gefolgt von 70% Alkohol.
- Ziehen Sie sterile Handschuhe und Kittel an und bringen Sie sterile Abdecktücher an der Operationsstelle an. Heben Sie die hintere Haut mit einer gezahnten Pinzette an und machen Sie mit der groben Schere einen 2-3 cm langen Schnitt in der dorsalen Mittellinie.
- Trennen Sie mit einer stumpfen Schere oder einer Sonde die darunter liegende Dermis von der Körperwand (auf beiden Seiten des Schnitts bei beidseitiger Transplantation oder auf einer Seite bei einseitiger Transplantation).
- Positionieren Sie die Maus wieder in die seitliche Position und identifizieren Sie die Position der Niere, indem Sie das Nierenprofil durch die Muskelwand betrachten. Sanfter manueller Druck mit Daumen und Zeigefinger auf den Bauch kann bei der Visualisierung der inneren Organe helfen.
- Machen Sie mit einer feinen Irisschere und unter Berücksichtigung großer Gefäße und Spinalnerven einen 1 cm langen Schnitt in der Körperwand parallel zur Wirbelsäule. Erweitern Sie diesen Schnitt auf 1,5-2,0 cm (etwas länger als die Längsachse der Niere), indem Sie die Schere vorsichtig weiter öffnen, nachdem Sie sie in den ersten Schnitt gesetzt haben.
- Äußere der Niere durch sanften Druck außerhalb der Muskelwand auf beiden Seiten der Niere mit dem Zeigefinger und Daumen. Stecken Sie die Hautränder unter die äußere Niere, die an der Körperwand aufliegt. Während die Niere nach außen gerichtet ist, halten Sie die Hydratation der Nierenkapsel aufrecht, indem Sie sterile Kochsalzlösung auftragen.
- Heben Sie mit einer feinen Pinzette #5 die Nierenkapsel vorsichtig aus dem Parenchym der Niere an und machen Sie mit einem feinen Skalpell einen 2-4 mm großen Schnitt in die Kapsel. Die Größe des Schnitts wird durch die Größe des Transplantats bestimmt, sollte jedoch minimiert werden, um die Integrität der Kapsel zu erhalten.
- Manipulieren Sie eine Pasteurpipette aus Glas, die dünn gezogen und feuerpoliert wurde und ein abgerundetes, geschlossenes Ende unter der Kapsel hat, das tangential zur Oberfläche der Niere verläuft. Öffnen Sie vorsichtig eine kleine Kapseltasche für die Transplantate und achten Sie darauf, das Nierenparenchym nicht zu beschädigen.
- Mit der feinen Pinzette wird die Schnittkante der Nierenkapsel angehoben und das Transplantat mit der feuerpolierten Glaspipette in die Tasche unter der Kapsel eingeführt. Mehrere Transplantate können unter der Nierenkapsel platziert und gleichmäßig auf der Nierenoberfläche verteilt werden.
- Wenn die Kapsel im Laufe der Transplantation dehydriert, sollte sie durch Auftragen von steriler Kochsalzlösung angefeuchtet werden.
- Wenn die Transplantation abgeschlossen ist, heben Sie vorsichtig die Seiten des Muskelwandschnitts an, um die Niere wieder in die Körperhöhle zu bringen. Beobachten Sie, dass die Transplantate nicht unter der Kapsel hervorrutschen.
- Verschließen Sie die Muskelwand mit einer einzigen Naht (4-0, FS-2 Vicrylnaht). Der chirurgische Eingriff kann an der kontralateralen Niere wiederholt werden, indem die Maus neu positioniert wird.
- Richten Sie mit einer Zahnzange die Hautschnittkanten aus und legen Sie 2-3 chirurgische Wundclips an, um den Schnitt zu schließen. Verabreichen Sie eine Analgesie (wir verwenden 5-10 mg/kg Carprofen mit einer subkutanen Injektion) und legen Sie die Maus in die seitliche Liegeposition in den Aufwachkäfig. Stellen Sie sicher, dass die Körpertemperatur mit der Wärme einer Lampe oder eines Heizkissens aufrechterhalten wird. Beobachten Sie, ob die Maus vollständig wiederhergestellt ist, was in weniger als 15 Minuten erfolgen sollte.
- Mäuse sollten in den nächsten 24 Stunden auf Anzeichen von postoperativen Schmerzen, Blutungen und/oder anderen Komplikationen beobachtet werden. Untersuchen Sie chirurgische Schnitte regelmäßig auf Anzeichen einer Infektion.
- Entfernen Sie die Wundclips 7-14 Tage nach der Operation mit einem chirurgischen Wundclip-Entfernungsgerät.
