Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Zellinjektion in Mäuse
- Bereiten Sie eine 1:1-Mischung aus Zellen:Basalmembran-Matrix (je 50 μL) vor.
- Fügen Sie zuerst die Zellen hinzu und pipettieren Sie dann nach und nach die Basalmembranmatrix. Vermeiden Sie das Einbringen von Luftblasen. Stellen Sie sicher, dass die Mischung unmittelbar vor der Tierinjektion hergestellt wird. Das Hinzufügen von Zellen zur Basalmembranmatrix über einen längeren Zeitraum kann dazu führen, dass sich Zellen in der Matrixmischung absetzen, was es schwierig macht, die Mischung kräftig zu schütteln. Dies führt zu einer erheblichen Variabilität der Tumorgröße zwischen den Mäusen.
- Vorsichtig mischen. Stellen Sie sicher, dass alle Schritte, die mit der Matrix zu tun haben, auf Eis ausgeführt werden. Die Basalmembranmatrix polymerisiert bei Raumtemperatur.
- Bereiten Sie die Spritzen für die Impfung vor.
- Laden Sie 0,5 ml Insulinspritzen (23 G) mit 100 μl der Zell-Basalmembran-Matrixlösung.
- Bewahren Sie die Spritzen auf Eis auf, um eine Polymerisation der Basalmembranmatrix zu vermeiden.
- Betäuben Sie Mäuse, indem Sie sie in eine Kammer mit Isofluran und Sauerstoff (2,5%) legen.
- Stellen Sie sicher, dass die Mäuse vor der Injektion tief betäubt sind (indem Sie sicherstellen, dass sie nicht auf ein Zehenklemmen reagieren).
- Führen Sie die Nadel in den rechten oder linken bukkalen Bereich ein. Dies geschieht durch den verfügbaren offenen Raum auf beiden Seiten des Mundes.
- Stellen Sie sicher, dass die Zunge der Maus nicht im Weg ist.
HINWEIS: Es ist leicht, die Zunge zu pieksen, was zu Zungentumoren führt. Bewege die Zunge bei Bedarf auf die gegenüberliegende Seite.
- Halten Sie die Spritze parallel zur bukkalen Region, während sie sich in der Mundhöhle befindet.
- Wenn Sie zur Injektion bereit sind, ziehen Sie die Spritze zurück und führen Sie sie langsam in einem Winkel von 10° ein.
- Injizieren Sie 100 μl der Zell-/Basalmembran-Matrix-Suspension über einen Zeitraum von 5 s.
- Halten Sie die Spritze weitere 5 s an Ort und Stelle, um sicherzustellen, dass das gesamte Material injiziert wird.
HINWEIS: Zur Kontrolle von nicht tumortragenden Mäusen injizieren Sie eine Mischung aus serumfreiem Medium und Matrix (wie oben beschrieben) ohne die Tumorzellen.
- Ziehen Sie die Spritze vorsichtig heraus.
- Setzen Sie den obigen Vorgang mit den restlichen Mäusen fort.
- Warten Sie 1 Woche, bis die Tumore grob auftreten (50–200mm3 für B4B8- und LY2-Zellen).
