Ernte der Chorioallantoismembran von Küken: Eine Methode zur Isolierung einer tumortransplantattragenden chorioallantoischen Membran aus Hühnerei

Zusammenfassung

Quelle: Schmidt, L. B. et al. Das Chick Chorioallantoic Membrane In-vivo-Modell zur Beurteilung der perineuralen Invasion bei Kopf- und Halskrebs. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt die Isolierung der tumortragenden chorioallantoischen Membran aus dem Hühnerembryo. Das geerntete CAM kann für weitere Downstream-Anwendungen verwendet werden.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Das CAM ernten

1. Bereiten Sie 6-Well-Platten mit 4 % PFA (Paraformaldehyd) pH 7,0 vor; eine Welle pro Ei, 2 mL pro Well.
2. Bringen Sie die Eier auf einen Labortisch. Mit einer Nadel, die an einer Spritze befestigt ist, um den Filmverband zu perforieren, tropfen Sie etwa 300 μl PFA über das CAM, um das CAM leicht zu versteifen und so den Ernteprozess zu erleichtern. Wiederholen Sie dies für alle Eier.
3. Entfernen Sie mit einer Schere die obere Hälfte der Eierschale (wo sich das Operationsfenster befindet) mit dem daran befestigten CAM (Abbildung 1I). Reduzieren Sie die Größe dieser Hälfte auf einen Durchmesser von ca. 3 cm. Fassen Sie die CAM mit einer feinen Pinzette und lösen Sie sie von der Eierschale, während Sie sie in PFA legen.

Ergebnisse

Abbildung 1: Transplantation von DRG, Zellen und Ernte von CAM: An Tag 8: A. CAM leicht zu beobachten nach Entfernung der Paraffinwachsmembran. B-C. Mit einer feinen Pinzette wird DRG auf den CAM aufgebracht. D. Das Ei wird mit einer Folie bedeckt und in den Brutkasten gelegt; Pfeile zeigen auf die Öffnungen, die abgedeckt sind. An Tag 10: E-F<...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
PFA (Paraformaldehyd-Lösung)	Sigma-Aldrich	# P6148-1KG	In Wasser verdünnen, um eine 4%ige PFA-Lösung herzustellen
Feine chirurgische, gerade, scharfe Schere	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	#14060-09	Wird verwendet, um das CAM-Gewebe am Tag 17 zu entnehmen
Befruchtete Lohmann Weiße Leghorn-Eier			Befruchtete Eizellen an frühen Befruchtungstagen, vorzugsweise am ersten Tag nach der Befruchtung. Die Eier, die in diesem Protokoll verwendet werden, stammen von der Geflügelfarm der Michigan State University
Extra feine Graefe Pinzette, gerade	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	# 11150-10	Wird verwendet, um DRG am Tag 8 auf das CAM zu transplantieren und an Tag 17 CAM-Gewebe zu entnehmen