Orthotope Inokulation von Schilddrüsenkrebszellen in die Schilddrüse der Maus: Ein Verfahren zur Etablierung eines orthotopen Mausmodells für Schilddrüsenkrebs

Zusammenfassung

Quelle: Julia Ramirez-Moya, et al. In-vivo-Hemmung von microRNA zur Verringerung des Tumorwachstums bei Mäusen. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video beschreibt das Verfahren zur orthotopen Inokulation von Schilddrüsenkrebszellen in die Schilddrüse von Mausmodellen, die dann als wertvolle Plattform dienen können, um die Karzinogenese zu beurteilen und mögliche Behandlungsstrategien zu entdecken.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Orthotope Inokulation von Zellen in der Schilddrüse

1. Vorbereitung der Zellen
   1. Entwicklung einer humanen Cal62-Schilddrüsenkrebszelllinie zur Überexpression eines transgenen Konstrukts, das konstitutiv GFP und Luciferase exprimiert. Selektion der transgenen Zellen durch Antibiotikaresistenz oder durch Sortierung der GFP-positiven Zellen mittels Durchflusszytometrie.
   2. Züchten Sie diese Zellen in DMEM, ergänzt mit Antibiotika (Penicillin und Streptomycin) und 10 % FBS bei 37 °C und 5 % CO₂.
   3. Suspendieren Sie 1 x 10⁵ Zellen in 5 μl PBS.
2. Zellinokulation in die Schilddrüse von Mäusen
   1. Injizieren Sie 100 μl Analgetikum (Buprenorphin) und 100 μl Antibiotikum (Cephalosporin) subkutan in 7 Wochen alte BALB/c nu/nu-Mäuse. Desinfizieren Sie die Injektionsstelle mit Alkohol.
   2. Injizieren Sie 5 μl der Zelllösung in die Schilddrüse der Mäuse.
      1. Betäuben Sie die Maus mit 3 % Isofluran, gemischt mit Sauerstoff, und legen Sie sie unter ein Stereomikroskop in einen sterilen Durchflussschrank. Beurteilen Sie den Grad der Anästhesie durch Pedalreflex (festes Zehenklemmen) und passen Sie die Anästhesieabgabe entsprechend an, um die chirurgische Ebene aufrechtzuerhalten.
      2. Tragen Sie eine Augensalbe auf beide Augen auf, um ein Austrocknen zu verhindern.
      3. Desinfizieren Sie bei jeder Maus den Hals mit Jodopovidon und machen Sie mit einer Schere einen ca. 2 cm großen Schnitt in die Haut. Nach dem Öffnen legen Sie den Hals frei, indem Sie die Speicheldrüsen verschieben.
      4. Präparieren Sie die Gurtmuskulatur mit einer Präparierzange und/oder einer Schere, um die Luftröhre und die Schilddrüse freizulegen. Injizieren Sie mit einer 10-μl-Spritze 5 μl der Zelllösung in den rechten Schilddrüsenläppchen, der sich an der Seite des Krikoidknorpels befindet.
      5. Positionieren Sie die Speicheldrüsen neu und nähen Sie den Schnitt mit Seide unter Verwendung von geflochtenen, beschichteten, nicht resorbierbaren Nähten.
      6. Geben Sie Jodopovidon in den Wundbereich und legen Sie die Maus auf eine thermische Decke, während sie sich von der Narkose erholt.
   3. Injizieren Sie am nächsten Tag nach der Operation subkutan ein Analgetikum (Buprenorphin) und fügen Sie 1 Woche lang 3 ml flüssiges Ibuprofen (40 mg/ml) in 250 ml Trinkwasser hinzu.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Basalmembranmatrix: Matrigel Basalmembranmatrix mit hoher Konzentration	Corning	#354248
In-vivo-Verabreichungsreagenz: Invivofectamine 3.0 Reagenz	Thermo Fischer	IVF3005
In-vivo-Bildgebungssoftware: IVIS-Lumina II Bildgebungssystem	Caliper Biowissenschaften