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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Entnahme des Rückenmarks
- Euthanasieren Sie die Maus mit einer CO2 -Kammer. Vermeiden Sie eine Zervixluxation, da dies aufgrund von Scherkräften zu einer Schädigung der Ganglienwurzeln führen kann. Führen Sie von hier an alle Schritte unter sterilen Bedingungen durch.
- Tränken Sie das Tier mit 70% Ethanol. Dieser Schritt ist wichtig für die Sterilisation und um zu verhindern, dass sich die Haare durch die inneren Organe ziehen.
- Lassen Sie die Maus von Ethanol trocknen. Jeglichen Kontakt von Ethanol mit den inneren Organen aufgrund von Neurotoxizität verhindern.
- Positionieren Sie die Maus nach dem Trocknen mit Stecknadeln in Bauchlage (mit der Vorderseite nach unten). Platzieren Sie die Stifte an jedem Hinter- und Vorderglied.
- Machen Sie mit einer Pinzette einen Schnitt in der Mittellinie, der sich kraniokaudal vom hinteren Hals bis zur Lendenwirbelsäule erstreckt. Als nächstes heben Sie die Hautlappen beidseitig mit einer Pinzette an und legen das Unterhautgewebe frei.
- Palpatieren Sie den Schädel der Maus bis zum kraniozervikalen Übergang. Schneiden Sie mit einer Schere senkrecht zum Tier mit einer schweren Pinzette die Halsmuskulatur und die Wirbelsäule am kraniozervikalen Übergang (dem 7. Halswirbel) durch. Präparieren Sie die Wirbelsäule kaudal und exzitieren Sie die Wirbelsäule mit einer schweren Zange, bis sie die Lendenwirbelsäule (Höhe der hinteren Gliedmaßen) erreicht.
- Führen Sie eine vollständige kaudale Durchtrennung auf Höhe der Lendenwirbelsäule (dem 5. Lendenwirbel) mit einer schweren Pinzette durch.
- Bewegen Sie die Maus darüber (mit der Vorderseite nach oben). Es ist nicht notwendig, den Schnitt abzudecken, da das DRG aus den unteren Wirbelebenen und nicht aus dem Halswirbel entnommen wird.
- Schneiden Sie an der Mittellinie vom Hals bis zum Bauch ab, ziehen Sie die Haut seitlich zurück und schneiden Sie dann, um das Bauchfell zu öffnen.
- Entfernen Sie die inneren Organe im Bauchfell (Leber, Milz, Bauchspeicheldrüse, Magen und Darm) en bloc. Als nächstes entfernen Sie die retroperitonealen Organe (d. h. Nieren und Bauchspeicheldrüse). Öffne die Brustwand im Schädelbereich.
- Schneiden Sie mit einer Pinzette und einer chirurgischen Klinge die Rippen ab und lassen Sie 5 mm Rippen beidseitig von der Wirbelsäule entfernt. An dieser Stelle ist die Wirbelsäule vom restlichen Körper getrennt.
- Waschen Sie die Wirbelsäule zweimal mit kalter (4 °C) frischer, phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) vom Blut.