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Zelltod-Screening mittels DAPI-Färbung: Eine Methode zum schnellen Screening des IR-induzierten klonogenen Zelltods in krebsartigen Zelllinien

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Kobayashi, D. et al. Einstufiges Protokoll zur Bewertung der Art des strahleninduzierten klonogenen Zelltods durch Fluoreszenzmikroskopie. J. Vis. (2017)

Dieses Video demonstriert die Methodik zum Screening auf wichtige Zelltodprofile in durch ionisierende Strahlung (IR) induzierten Krebszelllinien mit Hilfe von DAPI-Färbeassays. Die DAPI-gefärbten Zellkerne von Zielzellen, die sich im Zelltod befinden, weisen unterschiedliche Morphologien auf und können durch Fluoreszenzmikroskopie leicht identifiziert werden.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Vorbereitung der Materialien

  1. Deckgläser für Autoklaven
    1. Legen Sie die Deckgläser in ein Becherglas.
    2. Decken Sie den Glasbecher mit Folie ab.
    3. Autoklav bei 121 °C bei 15 psi für 20 min.
    4. Bei 50 °C trocknen. Bei Raumtemperatur in einer Kulturhaube lagern.
  2. Bereiten Sie die Fixierlösung vor: 3 % Paraformaldehyd + 2 % Saccharose in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS)
    1. In eine 1.000-ml-Glasflasche geben Sie 700 mL PBS und 30 g Paraformaldehyd.
      Vorsicht: Paraformaldehyd ist ätzend, tragen Sie geeignete Handschuhe.
    2. Paraformaldehy....

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Deckglas MatsunamiC013001
Paraformaldehyd Sigma-Aldrich Nr. 6148-1KG
Saccharose Sigma-Aldrich84097-250G
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung Cosmo BioArtikel-Nr.: 16232000
Skalpell Kai MedizinNr.20, 520-A
35 mm Zellkulturschale Falke353001
Inverses Phasenmikroskop ShimazuTel.: 114-909
Röntgenstrahler Faxitron BiopticsFaxitron RX-650
Quadratische Kulturschale CorningArtikel-Nr.: 431110
Schiebeglas MatsunamiPro-11
DAPI Färbereagenz Zelluläre Signalübertragung 8961S
Fluoreszenz-Mikroskop Nikon ECLIPSE Ni
Fluoreszenzmikroskop DAPI-Filter NikonU-FUW, BP340-390, BA420IF, DM410
Objektiv für Fluoreszenzmikroskop (20×) NikonPlan Apo λ 20X/0,75
Objektiv für Fluoreszenzmikroskop (60×, Öl) NikonPlan Apo λ 60X/1.40 Öl
Öl OlympN5218600
CCD-Kamera NikonDS-Qi2
Software zur digitalen Bilderfassung NikonNIS-Elements Dokument
Linsenreiniger Olymp OT0552
Chloroform WakoTel.: 035-02616

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Cell Death ScreeningDAPI StainingIonizing RadiationClonogenic Cell DeathFluorescence MicroscopyApoptosis DetectionMitotic CatastropheSenescence AnalysisCancer Cell LinesFixation Protocol

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