Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1.FMT Bildgebung
HINWEIS: Gemäß dem experimentellen Ziel können die iRFP-markierten Glioblastomzellen in vivo vor, während oder nach der Behandlung überwacht werden. Zu Bildgebungszwecken werden die Tiere mit einer Isofluran-Induktionskammer anästhesiert, während des Scanvorgangs in einer Bildgebungskassette aufbewahrt und in der Dockingstation des FMT-Imagers abgebildet.
- Nehmen Sie das Tier aus dem Käfig und stellen Sie es in die Isofluran-Induktionskammer. Schließen Sie die Kammer und schalten Sie den Sauerstofffluss und den Verdampfer auf 3–5 % ein.
- Überwachen Sie das Tier, bis es vollständig betäubt ist, in der Regel innerhalb von 1-2 Minuten. Bewusstlose Tiere sollten nicht auf äußere Reize reagieren.
- Nehmen Sie das anästhesierte Tier aus der Kammer und legen Sie das Tier in die Bildgebungskassette, indem Sie zuerst den Kopfadapter und dann das Tier mit der Vorderseite nach unten platzieren. Stellen Sie sicher, dass sich der Kopf in der Mitte der Kassette befindet.
- Setzen Sie die obere Platte der Kassette darauf und ziehen Sie die Einstellknöpfe bis zu 17 mm fest.
- Sobald das Tier sicher in der Bildgebungskassette sitzt, fahren Sie mit der Bildgebung fort, indem Sie die Kassette in die interne Dockingstation des FMT-Bildgebungsgeräts einsetzen, wo das Isofluran gepumpt wird, um das Tier betäubt zu halten.
- Führen Sie die Imager- und Analyzer-Software aus, indem Sie auf das Softwaresymbol doppelklicken.
- Wählen Sie im Fenster "Experimentelle Registerkarte" die Option "Datenbank" und "Studiengruppe" aus.
- Gehen Sie zum Fenster "Registerkarte "Scannen" und wählen Sie das Motiv für das Bild aus, indem Sie auf "Motiv auswählen" klicken. Wählen Sie außerdem den Laserkanal im Bereich "Laserkanal" aus. Wählen Sie für die FP635-markierten Zellen "Laserkanal 635 nm" und für FP720-markierte Zellen "Laserkanal 680 nm".
- Erfassen Sie ein Bild, indem Sie auf die Option "Aufnehmen" im Fenster "Registerkarte "Scannen" klicken. Passen Sie dann das Scanfeld an, indem Sie auf das Scanfeld im aufgenommenen Bild klicken und es an eine bestimmte Anzahl von Quellpositionen ziehen, in der Regel innerhalb von 20 bis 25 Quellen für die ipsilaterale Seite.
- Aktivieren Sie die Option "Zur Rekonstruktionswarteschlange hinzufügen" und klicken Sie im Fenster "Registerkarte "Scannen" auf "Scannen".
- Warten Sie, bis der Scanvorgang abgeschlossen ist, und entfernen Sie dann die Bildkassette aus der Dockingstation.
- Entfernen Sie die obere Platte der Kassette und setzen Sie das Tier wieder in den Käfig ein.
- Wiederholen Sie die Schritte 1.1 bis 1.12 für die übrigen Tiere.
>2. Bildanalyse
- Wählen Sie in der Imager- und Analyzer-Software das Fenster "Registerkarte "Analyse" aus.
- Laden Sie den Datensatz und das zu analysierende Subjekt, indem Sie auf die Schaltfläche "+" im Bereich "Datensatzauswahl" des Fensters "Registerkarte "Analyse" klicken.
- Sobald das Bild in das Fenster "Registerkarte "Analyse" geladen wurde, führen Sie die ROI-Analyse (Region of Interest) durch, indem Sie das Ellipsoid-Symbol auswählen, das sich in der oberen linken Ecke des Fensters "Registerkarte "Analyse" befindet.
- Stellen Sie den Schwellenwert im Bereich "Statistikdaten" auf Null ein, indem Sie mit der rechten Maustaste auf die Spalte "Schwellenwert" im Fenster "Registerkarte "Analyse" klicken.
- Der Gesamtwert im Feld "Statistische Daten" stellt das Signal der fluoreszenzmarkierten Glioblastomzellen dar, die in das Gehirn der Maus implantiert wurden.
- Wiederholen Sie die Schritte 2.2 bis 2.4 für die übrigen Tiere. Laden oder entfernen Sie ein neues Thema, indem Sie auf die Schaltfläche "+" bzw. "-" im Bereich "Datensatzauswahl" des Fensters "Registerkarte "Analyse" klicken.