Dezellularisierung des kardiopulmonalen Komplexes: Eine Technik zur Dezellularisierung von Herz und Lunge aus dem Mausmodell

Abstract

Quelle: Mayorca-Guiliani, A. E. et al. Dezellularisierung des kardiopulmonalen Komplexes der Maus. J. Vis. Exp. (2021)

Dieses Video demonstriert ein Verfahren zur Herstellung von dezellularisierten extrazellulären Matrix- oder EZM-Gerüsten durch Anwendung einer antegraden Perfusion von Detergenzien durch das Gefäßsystem. Die strukturellen ECM-Gerüste können dann verwendet werden, um den ECM-Umbau im Zusammenhang mit kardiopulmonalen Erkrankungen zu analysieren.

Protocol

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Postmortale Mikrochirurgie

1. Euthanasieren Sie die Maus mit einer CO₂ -Kammer.
   1. Setzen Sie die Maus in eine 4-Liter-Kammer und beginnen Sie, sie mit 100 % CO_{2 zu} füllen, beginnend bei 0,2 l/min für 2 Minuten, und steigern Sie sie, bis nach 3 Minuten ein Durchfluss von 0,8 l/min erreicht ist. Die Maus sollte während der ersten 2 Minuten bewusstlos werden, und dann sollte die Atmung aufhören (normalerweise etwa 5 Minuten, a....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mikrochirurgie
6-0 Naht, Nadel mit dreieckigem Schnitt (Vicryl)	Ethikon	6301124
9-0 Mikronaht (Safil)	B Braun	G1048611
Adson-Pinzette	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 11006-12
Adson-Pinzette mit Zähnen	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 11027-12
Castroviejo Mikronadelhalter	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Artikel-Nr.: 12061-01
CO2-Beatmungskammer für die Euthanasie von Mäusen
Deionisiertes Wasser (Milli-Q IQ 7000, Reinstwassersystem für Labor)	Merck	ZIQ7000T0
Einweg-Tablett aus Polystyrol (~30 × 50 cm)
Präpariermikroskop (Greenough, mit zweiarmigem Schwanenhals)	Leica	S6 D
Doppelseitiger Mikroskopspatel	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 10091-12
Dumont Mikrozange (zwei)	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 11252-20
Dumont Mikrozange mit 45° Spitzen	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 11251-35
Haarschneider	Oster	Tel.: 76998-320-051
Halsey Nadelhalter (mit Wolframkarbidbacken)	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 12500-12
Intravenöser 24-Gauge-Katheter (Insyte)	Bd	381512
Intravenöser 26-Gauge-Katheter (Terumo)	Surflo-W	SR+DM2619WX
Mayo-Schere (harter Schnitt, gerade)	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 14110-15
Mikrozange mit ringförmigen Spitzen	Äskulap	FM571R
Mikro-Federschere (Vannas, gebogen)	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 15001-08
Nadeln (27 Gauge; Mikrolanze)	Bd	Nr. 21018
Papiertuch (steril) oder chirurgische Serviette
Gezahnte Schere (CeramaCut, gerade)	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 14958-09
Pfannenwender (Freer-Yasargil)	Äskulap	OL166R
Spritzen (1 mL; Plastipak)	Bd	3021001
Spritzen (10 mL; Plastipak)	Bd	3021110
Sehnenschere (Walton)	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 14077-09
DEZELLULARISIERUNG
70 % Ethanol (absoluter Alkoholgehalt 99,9 %); absoluter Alkoholgehalt muss mit entionisiertem Wasser auf 70 % (vol/vol) eingestellt werden	Pflaume	1680766
Deionisiertes Wasser (Milli-Q IQ 7000, Reinstwassersystem für Labor)	Merck	ZIQ7000T0
Luer-zu-Schlauch-Außengewinde (1/8 Zoll)	Welt Präzisionsinstrumente	Nr. 13158-100
Luer-zu-Schlauch-Außengewinde (1/8 Zoll)	Welt Präzisionsinstrumente	Nr. 13158-100
PBS (pH 7,4, 10×, Gibco)	Thermo Fisher Scientific	70011044
Penicillin-Streptomycin	Gibco	15140122
Schlauchpumpe (mit 12 Kanälen)	Ole Dich	110AC(R)20G75
Silikonschlauch (mit 2 mm Innendurchmesser und 4 mm Außendurchmesser)	Ole Dich	Artikel-Nr.: 31399
Natriumazid	Sigma-Aldrich	08591-1ML-F
Natriumdesoxycholat (DOC)	Sigma-Aldrich	D6750-100G