Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Anästhesie und Trachealkanülierung
- Wiegen Sie die Maus, um die Dosierung von Anästhetika, postoperativen Analgetika und das Atemzugvolumen des Beatmungsgeräts zu bestimmen. Heizkissen auf 37 °C vorwärmen. Der chirurgische Aufbau ist in Abbildung 1 dargestellt.
- Injizieren Sie der Maus intraperitoneal eine Mischung aus Ketamin und Xylazin in einer Dosis von 80 mg/kg bzw. 10 mg/kg.
- Rasieren Sie das Mausfell am Hals und an der linken Seite des Brustkorbs schnell mit einem Elektrorasierer.
- Überprüfen Sie die Narkosetiefe, indem Sie den Schwanz und/oder die Hinterfüße einklemmen und das Tier in Rückenlage auf das Heizkissen legen. Legen Sie eine kleine Mullkompresse unter den Kopf des Tieres, um eine Überhitzung der Augen zu vermeiden. Tragen Sie Augengel auf, um Augentrockenheit zu vermeiden.
- Befestigen Sie die vier Gliedmaßen mit Klebeband auf der Oberfläche des Heizkissens. Führen Sie eine Schlaufe aus 5-0 Seidennaht unter den oberen Schneidezähnen durch und kleben Sie das Ende der Schlaufe mit Klebeband auf das Heizkissen. Dadurch bleibt das Maul des Tieres offen und die Kanülierung wird erleichtert.
- Tragen Sie Haarentfernungscreme auf die vorrasierten Stellen auf und massieren Sie sie 1 Minute lang sanft mit einem Wattestäbchen ein. Wischen Sie den Überschuss an Fell und Creme mit einer Gaze ab. Verwenden Sie Tropfen mit 0,9% iger Kochsalzlösung und Gaze, um die Schnittbereiche zu reinigen. Tragen Sie sterile Gazestücke auf den rasierten Hals und Thorax auf und tränken Sie sie in Jodopovidon.
Anmerkung: Wir empfehlen die Anwendung eines Lokalanästhetikums (Lidocain oder Bupivacain) auf die Inzisionsstellen.
- Stellen Sie das Beatmungsgerät auf ein Atemzugvolumen von 7 ml/kg und eine Beatmungsrate von 140 Hüben/min.
Anmerkung: Arbeiten Sie von nun an unter einem mikrochirurgischen Stereomikroskop.
- Halten Sie die Haut in der Mitte des Rachens und führen Sie mit einer kleinen Schere einen Schnitt von 0,5 cm entlang einer Schwanz-/Kopflinie durch. Trennen Sie die Lappen der Speicheldrüse und trennen Sie dann vorsichtig die Faszien des Sternohyoideus-Muskels mit einer gebogenen Präparierzange, bis Kehlkopf und Luftröhre sichtbar sind. Sichern Sie die Kanten der Öffnung mit Retraktoren, die an Gummibändern befestigt sind.
Anmerkung: Führen Sie diesen Schritt ohne Einschnitt der Muskeln durch. Ein geschulter Bediener wird in der Lage sein, das Tier über die Mundhöhle zu intubieren, ohne die Luftröhre sichtbar zu machen, so dass dieser Schritt optional ist.
- Halte die Zunge sanft zur Seite. Führen Sie mit einer Pinzette die abgestumpfte Innennadel einer 16 G Kanüle in die Luftröhre ein. Visualisieren Sie das korrekte Einführen in die Luftröhre durch den Rachenschnitt
.
- Schließen Sie die Kanüle an den Beatmungsventilator an und sorgen Sie für eine korrekte Belüftung, indem Sie den Abluftschlauch in Wasser halten. Das Vorhandensein von Blasen deutet auf eine korrekte Intubation hin.
Anmerkung: Um das Gewebe während der Operation feucht zu halten, legen Sie sterile Gaze, die mit 0,9%iger Kochsalzlösung und Jodopovidon getränkt ist, auf den Rachenschnitt. Kontrollieren Sie die Feuchtigkeit während des Eingriffs.
>2. Ligatur der LAD Koronararterie
- Lösen Sie die linke vordere Pfote vom Klebeband und bewegen Sie die Maus vorsichtig in die Dekubitusposition auf der rechten Seite. Sichern Sie die linke vordere Extremität, sobald sich das Tier in der richtigen Position befindet.
- Identifizieren Sie die Linie zwischen dem linken Musculus pectoralis minor und dem Musculus major und machen Sie mit einer Schere, die der Linie folgt, einen schrägen Hautschnitt auf 1 cm. Trennen Sie mit einer disparierenden stumpfen Mikroschere die Faszien der Brustmuskeln ohne Schnitt. Pflegen Sie die Brustmuskeln, die mit Retraktoren getrennt sind, die an Gummibändern befestigt sind.
- Stellen Sie das Beatmungsgerät auf einen positiven endexspiratorischen Druck (PEEP) von 3 cm H2O ein.
- Öffnen Sie die Brusthöhle mit einer stumpfen Pinzette am 3. Interkostalraum zwischen der 3. und 4. Rippe. Vermeiden Sie es, die innere Brustarterie zu berühren, da Blutungsgefahr besteht. Berühren Sie nicht Herz oder Lunge. Setzen Sie zwei Retraktoren in den Brustkorb ein, einen auf jeder Rippe (Abbildung 2A).
- Entfernen Sie mit einer gebogenen feinen Pinzette vorsichtig das Perikard und ziehen Sie es auseinander, ohne Herz und Lunge zu schädigen.
- Lokalisieren Sie die linke vordere absteigende Koronararterie (LAD). Die Arteria LAD erscheint als oberflächliche, hellrote Linie, die vom Rand der linken Ohrmuschel zur Spitze verläuft.
- Verwenden Sie einen Nadelhalter, um eine 7-0-Seidennaht 2 bis 3 mm unterhalb des linken Vorhofs unter den LAD zu führen. Ziehen Sie langsam an der Seide, um ein Reißen des Herzgewebes zu vermeiden. Binden Sie die Ligatur mit drei Knoten. Der untere linke Teil des linken Ventrikels wird nach der Ligatur sofort blass (Abbildung 2B–E).
Anmerkung: Es ist wichtig, nicht zu tief in die Herzhöhle einzudringen oder zu oberflächlich zu bleiben. Bei scheinoperierten Tieren ziehen Sie die Nahtseide unter das LAD und entfernen Sie sie langsam, um ein Reißen des Gewebes zu vermeiden.
- Lösen Sie die Rippenretraktoren, halten Sie die 3. Rippe mit einer Pinzette fest und machen Sie zwei Durchgänge mit einer 6-0 Seidennaht unter der 3. und 4. Rippe.
Vorsicht: Perforieren Sie nicht das Herz oder die Lunge. Knoten noch nicht festziehen.
- Geben Sie drei Tropfen 37 °C 0,9%ige Kochsalzlösung auf die Öffnung und schließen Sie das Auslassrohr für 2 oder 3 Atemzyklen, um die Lunge richtig aufzublasen. Ziehen Sie die Naht fest und sichern Sie sie mit zwei Würfen.
- Lösen Sie die Retraktoren, die die Muskeln halten, und helfen Sie ihnen, ihren richtigen Platz wiederherzustellen.
- Schließen Sie die Brusthaut mit zwei Stichen 5-0 Nahtseide und sichern Sie sie mit zwei Überwürfen. Schließen Sie die Halshaut mit einem Stich aus 5-0 Nahtseide und befestigen Sie sie mit zwei Würfen.
