Alle Verfahren mit Tiermodellen wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft
1. Chirurgische Implantation des telemetrischen Temperaturüberwachungssystems
- Lassen Sie die Tiere bei der Ankunft vom Verkäufer mindestens 1 Woche vor der Operation im Vivarium ruhen, um den Stress des Transports zu minimieren.
- Die Mäuse werden in einer Gruppe untergebracht (maximal 5 pro Käfig gemäß den lokalen IACUC-Richtlinien) bis zum Tag der Operation für die Implantation eines telemetrischen Temperaturgeräts. Halten Sie sie in Standardkäfigen von 7,25" (B) x 11,75" (L) x 5" (H) mit Maiskolbeneinstreu. Halten Sie den Lichtzyklus auf einem 12 x 12-Lichtzyklus aufrecht (an: 7 Uhr; aus: 19 Uhr). Halten Sie die Gehäusetemperatur bei 20–22 °C und die relative Luftfeuchtigkeit (RH) bei 30 % bis 60 %. Stellen Sie die Standard-Chow-Diät und Wasser ad libitum bereit, bis das EHS-Protokoll erreicht ist.
Anmerkung: Der Grundgedanke für die individuelle Unterbringung besteht darin, häufige Kampfverletzungen bei männlichen C57bl/6J-Mäusen zu vermeiden und jeder Maus ausreichend Gelegenheit zum spontanen Radlauf zu bieten.
- Zur Platzierung der Telemetriegeräte betäuben Sie die Maus mit Isofluran (4%, 0,4–0,6 l/min O2-Fluss) in einer Induktionskammer. Setzen Sie dann die Maus über einen Nasenkonus unter Dauernarkose (1,5%, 0,6 l/min).
- Verwenden Sie ein Gleitmittel für die Augen, z. B. eine Salbe für den Tierarzt, um die Augen des Tieres während der Operation vor Schäden oder Verletzungen zu schützen.
- Um das Operationsfeld vorzubereiten, rasieren Sie den Unterbauch mit einer kleinen Tierhaarschere oder verwenden Sie einen handelsüblichen Haarentferner. Verabreichen Sie während dieser Zeit die erste Dosis subkutanes Buprenorphin (0,1 mg/kg).
- Schrubben Sie den Bereich mit drei Waschgängen mit Povidon-Jod (oder einem ähnlichen keimtötenden Peeling), gefolgt von einer Spülung mit 70 % Isopropylalkohol (oder steriler Kochsalzlösung, je nach den örtlichen tierärztlichen Anforderungen). Übertragen Sie dann die Maus in den Operationsbereich.
- Verwenden Sie ein selbstklebendes Tuch, um die Operationsstelle an der Maus zu isolieren. Machen Sie mit sterilen Instrumenten und aseptischer Technik einen ~1 cm langen Schnitt an der Mittellinie entlang der Linea alba, etwa 0,5 cm vom Rippenrand entfernt. Trennen Sie dann die Haut von der Muskelschicht und machen Sie einen etwas kleineren Schnitt an der Linea Alba, wobei Sie darauf achten, den Darm oder die inneren Organe nicht zu beschädigen.
- Sobald die Muskelschicht geöffnet ist, platzieren Sie das sterile Telemeter (wiederverwendbares batterieloses Miniatur-Radiotelemetriegerät; 16,5 x 6,5 mm) in die intraperitoneale Höhle vor den kaudalen Arterien und Venen und dorsal zu den Verdauungsorganen, damit es frei schweben kann.
Anmerkung: Alle Telemeter werden zwischen den Anwendungen mit Wasser und Seife gereinigt, gründlich gespült und mit Ethylenoxid gassterilisiert. Wenn keine Gassterilisation verfügbar ist, wird das Eintauchen in Sterilisationslösungen (gemäß den Empfehlungen des Herstellers für Verdünnung und Eintauchzeit) zur Desinfektion und Sterilisation der Telemeter akzeptiert.
- Verschließen Sie die Bauchöffnung mit einer sterilen 5-0 resorbierbaren Naht und verschließen Sie die Haut mit einem einfachen unterbrochenen Stich mit 5-0 Prolin-Naht.
Anmerkung: Das Telemeter im Bauchfach schweben zu lassen, ohne es an die Bauchdecke zu binden (eine vom Hersteller empfohlene Methode), hat sich als erfolgreich erwiesen und wird von den Autoren bevorzugt, um überschüssige Spannungen in der Bauchdecke während der Heilung zu beseitigen. Darüber hinaus hat dies keinen Einfluss auf die Fähigkeit des Empfängers, das Signal vom Sender zu erhalten.
- Platzieren Sie die Maus in ihrem sauberen Käfig mit einem tragbaren Heizkissen unter dem Käfig. Überwachen Sie die Maus während der ersten Stunde nach der Narkose alle 15 Minuten und kehren Sie dann in die Tierhaltungseinrichtung zurück.
