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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. EHS-Protokoll
- Platzieren Sie die Maus in der Nacht vor dem EHS-Protokoll bei Raumtemperatur (~25 °C, ≈30 % relative Luftfeuchtigkeit) in der Klimakammer, um sich an die Kammer zu gewöhnen.
- Verwenden Sie ein Datenerfassungssystem, um die kontinuierliche Kerntemperatur (Tc) zu erfassen, die über Nacht über 30 s-Intervalle gemittelt wird.
- Stellen Sie am Morgen des EHS-Protokolls sicher, dass sich die Maus auf oder unter einem normalen Bereich der Tagestemperatur befindet, bevor Sie die Kammertemperatur erhöhen (d. h. 36–37,5 °C). Dies stellt sicher, dass die Maus kein Fieber hat und in dieser Zeit keinen übermäßigen Stress erlebt hat.
- Sobald die Maus stabil ist und sich in einem Bereich der normalen Ruhekerntemperatur befindet, entfernen Sie das Futter und das Wasser und wiegen Sie das Tier. Schließen Sie die Kammertür und erhöhen Sie die Kammertemperatur auf einen Zielwert von 37,5 °C und 40 % bis 50 % relativer Luftfeuchtigkeit oder die gewünschte Umgebungstemperatur und Luftfeuchtigkeit. Überprüfen Sie die Temperatur und Luftfeuchtigkeit der Kammer mit einem kalibrierten Temperatur- und Feuchtigkeitsmonitor.
- Umgeben Sie die Kammer mit einem Verdunkelungsvorhang, um Licht und Störungen während des Protokolls so gering wie möglich zu halten. Überwachen Sie die Maus während des Protokolls kontinuierlich über ferngesteuerte IR-beleuchtete Kameras. Fokussieren Sie eine zweite Kamera auf den Temperatur- und Feuchtigkeitsmonitor, der in der Nähe des Laufrads platziert ist. Nehmen Sie alle Anpassungen am Regler für den Sollwert der Klimakammer vor, um genaue Temperaturmesswerte in der Nähe des Tieres zu gewährleisten.
- Sobald die Kammer ihre Zieltemperatur erreicht hat, die von der zweiten Kamera am Temperaturmonitor gemessen wird (dies kann ~30 Minuten dauern), öffnen Sie schnell die Kammertür und setzen Sie die Maus in das Zwangslaufrad.
- Starten Sie das Protokoll für das Zwangslaufrad bei einer Geschwindigkeit von 2,5 m/min und erhöhen Sie die Geschwindigkeit alle 10 Minuten um 0,3 m/min, bis die Maus einen Tc von 41 °C erreicht. Sobald die Maus diese Kerntemperatur erreicht hat, lassen Sie die Geschwindigkeit konstant bleiben, bis die Symptome eingeschränkt sind, die durch einen scheinbaren Bewusstseinsverlust, einen Rückwärtssturz oder eine Ohnmacht und die Unfähigkeit, weiterzulaufen oder sich am Lenkrad festzuhalten, gekennzeichnet sind. Bestätigen Sie diesen Zeitpunkt, wenn die Maus das Rad dreimal rückwärts dreht, ohne dass eine körperliche Reaktion zu erkennen ist. Alternativ können Sie einen humanen Endpunkt nach den lokalen IACUC-Regeln identifizieren, um zu bestimmen, wann das Protokoll gestoppt werden soll (z. B. wenn Tc ~43 °C). Dieser Endpunkt liegt bei praktisch allen Mäusen leicht über der Symptomlimitierung.
- Um das Rapid Cooling-Protokoll (R) durchzuführen, stoppen Sie das Rad, sobald die Maus die Symptombeschränkung erreicht hat, und entfernen Sie es sofort vom erzwungenen Laufrad. Wiegen Sie die Maus und setzen Sie sie wieder in ihren Käfig, um sich bei Raumtemperatur zu erholen. Lassen Sie während dieser Zeit die Kammertür offen und stellen Sie den Sollwert des Inkubators auf Raumtemperatur zurück, damit die Kammer schnell abkühlen kann. Dieses Verfahren führt zu einem Langzeitüberleben von >99 %.