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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Vorbereitung der Maus
- Betäubung der Maus
- Bereiten Sie Natrium-Pentobarbital (50 mg/kg) in einer Spritze vor.
- Fassen Sie die Maus (8 Wochen alter Rüde C57BL/6) mit der linken Hand, so dass ihr Bauch nach oben zeigt und ihr Kopf tiefer als ihr Schwanz ist. Desinfizieren Sie die Bauchhaut mit 75% Alkohol.
- Halten Sie die Spritze in der rechten Hand, stechen Sie mit der Nadel die weiße Bauchlinie leicht zur rechten Hautseite um 3–5 mm ein. Achten Sie darauf, dass die Spritzennadel und die Haut in einem 45°-Winkel stehen, injizieren Sie das Pentobarbital langsam in die Bauchhöhle. Desinfizieren Sie nach der Rasur die Schnittstelle der Maus 3 Mal abwechselnd mit 75%igem Alkohol und Chlorhexidinlösung.
- Prüfen Sie, ob die Anästhesie erfolgreich war, da kein Aufrichtreflex vorhanden war.
- Injizieren Sie Rhodamin B isothiocyanat-dextran in die Schwanzvene.
- Bereiten Sie 100 μl 10 mg/ml Rhodamin B Isothiocyanat-Dextran in einer Spritze vor.
- Wischen Sie den Schwanz der Maus mit 75% Alkohol ab.
- Halten Sie den Schwanz mit der linken Hand fest, halten Sie die Spritze in der rechten Hand mit der Nadel parallel zur Vene und injizieren Sie den 100 μL Farbstoff.
- Stoppen Sie die Blutung nach der Injektion mit einem Wattestäbchen.
- Tränken Sie das Bauchfell der Maus mit Gaze, die mit sterilem Wasser angefeuchtet ist, und rasieren Sie den Bauch der Maus mit einem Rasiermesser, indem Sie in Richtung des Fells streichen. Nach der Rasur um die Inzisionsstelle der Maus 3 mal abwechselnd mit 75% Alkohol und Chlorhexidinlösung desinfizieren.
- Nachdem Sie ein Heizkissen mit 75% Alkohol abgewischt haben, öffnen Sie das Heizkissen und legen Sie die Maus auf den Rücken in das Heizkissen, um ihre Körpertemperatur auf 37 °C zu halten.
2. Reparieren der Mausleber mit dem Körperorgan-Bildgebungsrahmen
HINWEIS: Der kommerzielle Organbildgebungsrahmen wurde noch nicht veröffentlicht.
- Stellen Sie einen sauberen Saugnapf in eine feste Position.
- Installieren Sie ein Organbildgebungsgerät (Abbildung 1) und wischen Sie das Heizkissen und den Saugnapf mit 75 % Alkohol ab.
- Verbinden Sie den Saugnapf (5 mm Durchmesser) mit dem Schlauch der Vakuumpumpe und schalten Sie die Vakuumpumpe ein.
- Auf einem sterilen Tisch, sterilisiert mit 75% Alkohol, desinfiziert die Inzisionsstelle der Maus 3 mal abwechselnd mit 75% Alkohol und Chlorhexidinlösung, dann desinfiziert die Inzisionsstelle der Maus 3 mal abwechselnd mit 75% Alkohol und Chlorhexidinlösung, dann mit einer chirurgischen Schere 2 cm Haut vom unteren Sternumrand der Maus abschneiden und die Leber freilegen.
- Legen Sie die Maus zusammen mit dem Heizkissen auf die Halterungsbasis.
- Stellen Sie die Organbildgebungsvorrichtung so ein, dass der Saugnapf die Leber hält. Saugen Sie dann mit einem Unterdruck von 30–35 kPa ab, so dass die Leber am Saugnapf anhaftet (Abbildung 2).
>3. Einstellen des Multiphotonen-Laser-Scanning-Mikroskops
- Schalten Sie das Multiphotonenmikroskop ein und wählen Sie das 60x/1,00 W Objektiv.
- Befestigen Sie den Rahmen und die Maus unter der Objektivlinse.
- Füge einen Tropfen normale Kochsalzlösung hinzu, die die gesamte Linse bedecken kann, die die Mitte des Saugnapfes ist, und stelle die Objektivlinse so ein, dass sie nur die normale Kochsalzlösung berührt.
- Doppelklicken Sie auf das Computersymbol, um die Lasersoftware einzuschalten und den Schalter einzuschalten. Halten Sie dann den Netzschalter und den Auslöser 3 s lang gedrückt.
- Stellen Sie die Wellenlänge auf 800 nm ein.
- Starten Sie die Mikroskop-Betriebssoftware über den Computer.
- Stellen Sie für die Aufnahmeeinstellung Laser 800 ein.
