$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Laparotomie
- Tiere mit Xylazin (10 mg/kg) und Ketaminlösung (80 mg/kg) subkutan (0,1 ml/10 g Körpergewicht) mit einer 1 ml-Spritze und einer 13 x 0,45 mm Nadel 26 G 1/2 anästhesieren. Überprüfen Sie, ob die Anästhesietiefe ausreichend ist, indem Sie den Zeh einklemmen. Kontrollieren Sie die Körpertemperatur mit beheizten Pads. Stellen Sie sicher, dass alle chirurgischen Materialien steril sind.
- Reinigen Sie den Bauchbereich mit 5% iger Povidon-Jod-Lösung und verwenden Sie einen Trimmer, um die Haare zwischen Brust und Unterbauch (ca. 2 cm2) zu entfernen. Reinigen Sie den Operationsbereich mit 70% Alkohol.
- Fixieren Sie das Tier mit chirurgischem Klebeband auf der Operationsplatte. Schneiden Sie mit einer Schere 5 mm der Haut horizontal am oberen Teil des Bauches und 1 cm unterhalb des Xiphoid-Fortsatzes ab. Wiederholen Sie den Schnitt am Bauchfell. Dies führt zu einer Laparotomie mit minimaler Freilegung der Kavität.
>2. Ortung und Freilegung der Bauchspeicheldrüse
- Ziehen Sie die Leber mit Hilfe eines Retraktors in Richtung des Mauskopfes, ~1 cm vom Darm entfernt.
- Lokalisieren Sie den Bereich der Bauchspeicheldrüse, der Natriumtaurocholat injiziert wird (Pankreaskopf). Lokalisieren Sie den Zwölffingerdarm in Bezug auf die Leber – unterhalb der Leber auf der rechten Seite (auf der linken Seite, wenn die Maus betrachtet wird). Der Zwölffingerdarm ist der erste Teil des Dünndarms und mit dem letzten Teil des Magens verbunden.
- Heben Sie die Leber mit Hilfe einer Pinzette in Richtung Tierkopf und ziehen Sie vorsichtig am Dünndarmteil. Fixieren Sie die beiden seitlichen Enden des Dünndarms mit einer 6-0 Polypropylen-Naht, um den distalen Teil des Gallengangs communis besser sehen zu können.
>3. Schwere akute Pankreatitis-Induktion
- Den proximalen Gallengang vorübergehend mit einem Mikrogefäßclip verschließen, um zu verhindern, dass eine retrograde Infusion in die Leber gelangt. Der Gallengang communis ist auf der Leberseite des Zwölffingerdarms zu sehen und seine Verbindung mit dem Zwölffingerdarm erscheint weiß. Legen Sie das Organ aus der Bauchhöhle frei.
- Punktieren Sie die periampulläre Region (weißlicher Teil der Dünndarmwand), um mit einer 0,4-mm-Nadel, die mit einem 0,54-mm-Polyethylenschlauch verbunden ist, Zugang zum gemeinsamen Gallengang zu erhalten.
- Machen Sie einen provisorischen Verschluss des distalen Gallengangs communis mit 8-0 Naht, um zu verhindern, dass die Natriumtaurocholatlösung in den Zwölffingerdarm austritt.
- Starten Sie die Infusionspumpe und programmieren Sie eine Infusion von 2,5 % Natriumtaurocholatlösung (verdünnt in 0,9 % Kochsalzlösung) bei einer konstanten Geschwindigkeit von 10 μL/10 g Körpergewicht für 3 Minuten.
- Entfernen Sie nach der Infusion den Mikrogefäßclip, den provisorischen 8-0 Naht und die Injektionsnadel aus dem Gallengang der Bauchspeicheldrüse, um den physiologischen Fluss der Galle wiederherzustellen.
- Zum Schluss den Bauch mit einem nicht saugfähigen monofilen Polypropylen-Nahtmaterial 6-0 vernähen. Die Zeit zwischen der Laparotomie und der Endnaht sollte maximal 30 min betragen (siehe Abbildung 1).
- Nach der Operation werden die Tiere in Polyethylenboxen untergebracht, die mit Holzspänen und Wasser und Futter ad libitum ausgekleidet sind.
- Kontrollmäuse sind auf die gleiche Weise wie die Versuchsmäuse zu behandeln, jedoch darauf zu achten, dass das Infusat nur aus Kochsalzlösung besteht. Führen Sie den chirurgischen Eingriff und die Infusion von Kochsalzlösung (10 ml/min, für 3 min) in einer Kontrollgruppe (SHAM) durch, um die durch Operation und Kanülierung verursachte Entzündungsverzerrung zu beseitigen.
- Verwenden Sie Tramadol 12,5 mg/kg subkutan alle 8 Stunden, beginnend nach der postoperativen Genesung.
