Transversale Aortenbogenbandbildung im Mausmodell: eine minimalinvasive Technik bei Mäusen zur Induktion von hohem Druck im linken Ventrikel

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Zaw, A. M. et al. Minimalinvasive transversale Aortenverengung bei Mäusen. J. Vis. Exp. (2017)

In diesem Video demonstrieren wir ein experimentelles Protokoll für minimalinvasive transversale Aortenverengung bei Mäusen, um die durch Drucküberlastung induzierte Herzinsuffizienz zu untersuchen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Vorbereitung des Operationsortes

Desinfizieren Sie die Operationsstelle mit 75%igem Isopropylalkohol. Stellen Sie die Temperatur des Heizkissens auf 37 °C ein, um Veränderungen der Herz- und Atemfrequenz des betroffenen Tieres zu vermeiden.
Verwenden Sie chirurgische Instrumente, die 30 Minuten lang in einem Schwerkraftsterilisator bei 121 °C sterilisiert wurden, oder mit anderen geeigneten Methoden.
Nehmen Sie 2–4 30-Gauge-Nadeln und biegen Sie sie mit einem Nadelhalter, wie in Abbildung 1 zu sehen, um ein Werkzeug für die Ligatur und Gewebetrennung sowie für die Verwendung als Retraktor herzustellen. Montieren Sie die nun gebogene Nadel auf einen Baumwollapplikator für den Einsatz in der Chirurgie.
Blummen Sie eine 27-Gauge-Nadel ab und biegen Sie sie mit dem Nadelhalter um 90º. Glätten Sie die Spitze, indem Sie eine harte Oberfläche reiben, um einen 0,4 mm Abstandshalter im Ligaturschritt zu erhalten.

>2. Vorbereitung von Tieren

Betäuben Sie eine 2 Monate alte, männliche, 22–25 g C57BL/6N Maus mit einer geeigneten Ketamin-Xylazin-Mischung im Verhältnis zum Körpergewicht: 100 mg/kg + 10 mg/kg i.p. Bestätigen Sie die Anästhesie mit dem negativen Schwanz-Pinch-Reflex.
Entfernen Sie die Haare am vorderen Hals und an der Brust mit einer 2- bis 3-minütigen Anwendung der Enthaarungscreme. Entfernen Sie die Creme mit warmem Wasser und einem Baumwollapplikator.
Tragen Sie eine Augensalbe oder ein Gel auf die Augen des Tieres auf, um das Austrocknen der Hornhaut zu verhindern.
Legen Sie das Tier in Rückenlage auf ein Heizkissen und führen Sie eine intraoperative Überwachung durch, wobei Sie darauf achten müssen, dass alle 15 Minuten eine entsprechende Dokumentation geführt wird.
Befestigen Sie die Gliedmaßen mit chirurgischem Papierband am Heizkissen, um das Tier während der Operation in der richtigen Position zu halten.
Desinfizieren Sie die Haut abwechselnd dreimal mit Alkohol und Povidon-Jod-Lösung.
Verwenden Sie ein steriles Abdecktuch mit einem freiliegenden Operationsfeld, um eine Kontamination zu vermeiden. Verwenden Sie für jede Maus und nach Bedarf neue sterile Handschuhe.

>3. Ligationsverfahren

Öffnen Sie die Haut der Maus in der Mittellinienposition von Hals und Brust mit einem Skalpell.
Ziehen Sie die Schilddrüse in Richtung Kopf, indem Sie das Bindegewebe mit einer stumpfen Schere vorsichtig trennen.
Trennen Sie die Muskelschicht an der Luftröhre an der Mittellinie zu beiden Seiten hin mit den gebogenen Nadeln.
Schneiden Sie das Brustbein mit der stumpfen Schere bis zur zweiten Rippe (ca. 5 mm) ab. Öffnen Sie den Schnitt mit einem Retraktor oder einer gebogenen Pinzette.
Trennen Sie die Thymuslappen voneinander und von der unteren Brustwand, indem Sie das Bindegewebe mit der gebogenen Nadel trennen; der Querbogen der Aorta und zwei Halsschlagadern sind an dieser Stelle deutlich sichtbar.
Legen Sie die gebogene Nadel unter den Bogen und perforieren Sie sie zwischen Gefäßwand und Bindegewebe auf der anderen Seite, indem Sie den gebogenen Kopf herausdrücken.
Ziehen Sie mit der gebogenen Nadel das monofile Nahtmaterial 6-0 unter den Aortenbogen.
Legen Sie den Abstandshalter in die Schlaufe und fixieren Sie die Naht mit einem Doppelknoten. Entfernen Sie den Abstandshalter vorsichtig.
Bestätigen Sie eine erfolgreiche Einschnürung mit der Knotenstellung und schneiden Sie die Enden der Naht ab.
Verschließen Sie die Brustwand mit einer 6/0-Seidennaht mit einem einfachen, unterbrochenen Nahtmuster. Verschließen Sie die Haut mit einer monofilen Naht 6/0 in einem kontinuierlichen Nahtmuster.

>4. Postoperative Pflege

Tragen Sie Povidon-Jod-Lösung auf die Nahtstelle auf und setzen Sie das Tier zur Genesung und postoperativen Überwachung in einen vorgewärmten Käfig.
Injizieren Sie Buprenorphin (0,05–0,1 mg/kg s.c. alle 12 Stunden), nachdem das Tier das Bewusstsein wiedererlangt hat, um Schmerzen zu lindern und die Maus mit geeignetem weichem Futter zu versorgen.
Bringen Sie das Tier nach vollständiger Genesung in einen 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklusraum zurück.

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Prozess der Formung der gewünschten Nadelhaken durch Biegen einer 1-Zoll-Nadelspitze mit 30 Gauge. (A) Die originale 1-Zoll-Nadelspitze mit 30 Gauge. (B) Fassen Sie die Nadelspitze mit dem Nadelhalter und biegen Sie sie etwa auf halber Länge. Biege die Nadel zu einer Schlaufe, wobei du je nach Bedarf den Nadelhalter und die Hände be...