Entnahme pränataler Mausembryonen: Ein Verfahren zur Entnahme von Embryonen von trächtigen Mäusen

Zusammenfassung

Quelle: Yun, K. Bewertung von Obstruktionsdefekten der Harnwege durch Methylenblau-Farbstoffinjektion. J. Vis. Exp.(2017)

Dieses Video zeigt die Entnahme von Embryonen aus einer trächtigen Maus. Die gewonnenen perinatalen Embryonen können als Modellsysteme für die Untersuchung der Entwicklung von Säugetieren verwendet werden.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Dissektion pränataler Embryonen

1. Reinigen Sie Präparierscheren und -zangen mit 70% Ethanol.
2. Um perinatale Embryonen bei E18.5 oder E19.5 zu entnehmen, werden trächtige Mäuse zunächst durch CO₂ -Inhalation eingeschläfert und dann nach ethischen Richtlinien eine Gebärmutterhalsluxation durchgeführt.
   Anmerkung: Die schwangere weibliche Maus gebiert in der Regel ab E18,5, größere Nieren sind jedoch leichter zu manipulieren. Daher ist es einfacher, diese Analyse an Nieren mit E19,5 kurz vor der Geburt durchzuführen. Welpen mit beidseitigen Harnwegsobstruktionen sterben jedoch nach der Geburt. Abhängig von den Eigenschaften der Versuchsmäuse sollte empirisch ein geeigneter Entnahmetag/-zeitpunkt bestimmt werden.
3. Sprühen Sie 70%iges Ethanol auf die ventrale Bauchfläche und öffnen Sie dann die Bauchhöhle ventral mit einer Präparierschere und einer Pinzette.
4. Heben Sie die gesamte Gebärmutter an und trennen Sie sie vom Körper, indem Sie mit einer Präparierschere in die Spitzen der Gebärmutterhörner schneiden.
5. Spülen Sie die gesamte Gebärmutter mit 1x PBS in einer Petrischale.
6. Schneiden Sie die Gebärmutter segmental mit einer Präparierschere und entfernen Sie Plazenta-Dezidua mit einer Präparierzange, um die Embryonen in Dottersäcken freizulegen.
7. Entfernen Sie zuerst den Dottersack und entfernen Sie dann die Amnionmembran mit einer Präparierzange, um die perinatalen Embryonen zu befreien.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Feinfühlige Bedienungsschere	Roboz Chirurgisches Instrument Co.	RS-6702
Mikro-Präparierzange	Roboz Chirurgisches Instrument Co.	RS-5135
Dumont Pinzette; Muster #5	Roboz Chirurgisches Instrument Co.	RS-5045
Quality Biological Inc. NORMALE SALINE - 500ML	Fischerwissenschaftlich	Tel.: 50-983-204