Isolierung der Eierstöcke von Neugeborenen-Mäusen: Ein chirurgischer Eingriff zur Entnahme eines Eierstockpaares aus einem neonatalen Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: et al. Morgan, S. Kultur und Co-Kultur von Maus-Eierstöcken und Eierstockfollikeln. J. Vis. Exp. (2015).

In diesem Video beschreiben wir einen chirurgischen Eingriff, um Eierstöcke von einer neugeborenen Maus zu isolieren.

Protokoll

Alle Verfahren mit Tiermodellen wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE Veterinärprüfungsausschuss überprüft.

>1. Die Sektion der Eierstöcke bei Neugeborenen und die Kultur

1. Geben Sie 1 ml Seziermedium (3 mg/ml BSA in Leibowitz L15-Medium auflösen und durch einen 0,2 μm Porenfilter mit 25 mm Durchmesser sterilisieren) in jede sterile Embryoschale aus Glas.
2. Keulung von neugeborenen Mäusewelpen, die zwischen dem 0. und 5. Tag nach der Geburt alt sind, und wird durch Enthauptung gekeult.
3. Fassen Sie die Haut, die die Bauchdecke bedeckt, mit einer feinen Dissektionezange und machen Sie einen großen Schnitt in die Haut und die Körperwand. Ziehe den Schnitt so auf, dass der gesamte Bauch freiliegt. Die Blase ist in diesem Stadium in der Regel angeschwollen und kann punktiert werden, um die Dissektion zu erleichtern.
4. Schieben Sie die Eingeweide mit einer Uhrmacherzange aus dem Weg. Folgen Sie den Gebärmutterhörnern von der Blase bis zur Niere auf jeder Seite. Der Eierstock befindet sich direkt unter der Niere am oberen Ende der Gebärmutter und erscheint unter einem Präpariermikroskop als wolkenartige Struktur.
5. Fassen Sie den Eierstock vorsichtig mit einer Uhrmacherzange und lösen Sie ihn mit einer Schere von der Befestigung an der Gebärmutter. Übertragen Sie das Eierstockpaar in Embryoschalen mit vorgewärmtem Präpariermedium.
6. Führen Sie eine Feindissektion der Eierstöcke unter einem Dissektionsmikroskop auf einem beheizten Tisch (37 °C) durch. Verwenden Sie Insulinnadeln, um den Schleimbeutel und überschüssiges Material, einschließlich des Eileiters, abzuschneiden, bis nur noch der Eierstock übrig bleibt.
7. Übertragen Sie jeden Eierstock mit einer fein gezogenen Pipette aus gebogenem Glas in die Vertiefung einer Kulturplatte.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Leibowitz L15	Invitrogen	11415049
αMEM	Invitrogen	22571020	Lieferung als Natriumbicarbonat gepuffert (2.200 mg/L)
Rinderserumalbumin	Sigma Aldrich	Nr. A9418	Für Präpariermedium
Rinderserumalbumin	Sigma Aldrich	Nr. A3311	Für Nährmedium
Rinderserumalbumin	Sigma Aldrich	Nr. A2153	Zum Beschichten von Glaspipetten
Fsh	Merck Serono	Gonal F	Oft ist eine Chargenprüfung notwendig. Stammlösung von 1 IE/10 μl in αMEM auffüllen und bei -20 °C lagern
Spritzenvorsatzfilter (25 mm, 0,2 μm)	Greiner	16532K	Celluloseacetat-Filter zum Filtrieren größerer (>5 ml) Medienvolumen.
Sterile Röhrchen	Greiner	187261
24-Well-Platte	Greiner	Artikel-Nr.: 662160
Insulin-Nadeln	BD medizinischer Bedarf	Tel.: 037-7606	0,33 mm (29 G) + 1 ml
Embryoschalen aus Glas	VWR	Tel.: 720-0579	Vor Gebrauch sterilisieren, dann erwärmen
Glaspipetten	Fisher Scientific	10209381	BSA-beschichtet vor Gebrauch
Akupunktur-Nadeln	Acumedic GmbH	30 mm x 0,25 Typ C
Formalinlösung, neutral gepuffert, 10%	Sigma Aldrich	HT5014-120mL
Whatman-Nukleoporen-Membranen	Camlab	WN/110414	Glänzende Oberfläche nach oben, Polycarbonat, 13 mm Durchmesser, 8,0 μm Porengröße