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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Vorbereitung des Tieres
- Injizieren Sie 30 Minuten vor der Operation eine Analgesie (4 mg/kg Carprofen und 0,1 mg/kg Buprenorphin).
- Notieren Sie das Körpergewicht der Maus, um die zu injizierende Dosis von Rose Bengal anzupassen (10 μl/g, d. h. 100 μg/g).
- Platzieren Sie die Maus in der Induktionskammer mit einer Isofluran-Flussrate von 4%, um sie zu betäuben, bis die spontane Bewegung des Körpers und der Vibrissen aufhört.
- Übertragen Sie die Maus in den stereotaktischen Rahmen und platzieren Sie sie in Bauchlage mit der Nase in der Anästhesiemaske. Fixieren Sie das Tier und halten Sie die Isoflurankonzentration 1 Minute lang bei 4 %. Reduzieren Sie dann die Isoflurankonzentration und halten Sie sie bei 2%.
- Führen Sie die Rektalsonde vorsichtig ein, um die Temperatur während des gesamten chirurgischen Eingriffs zu überwachen. Stellen Sie das zugehörige Feedback-gesteuerte Heizkissen so ein, dass die Körpertemperatur der Maus auf 37 °C gehalten wird.
- Tragen Sie die Dexpanthenol-Augensalbe auf beide Augen auf und reinigen Sie die Haut und das umliegende Fell mit einem Desinfektionsmittel.
>2. Photothrombose-Modell
- Machen Sie einen 2,0-2,5 cm langen Schnitt und ziehen Sie sich zurück, um den Schädel freizulegen. Führen Sie die Schädelfreilegung mit einem einzigen Schnitt durch, um Wundkomplikationen zu vermeiden.
- Entfernen Sie das Periost vorsichtig mit Watte und identifizieren Sie die koronalen Nähte.
- Schutzbrille aufsetzen, 561 nm Laser einschalten und Bregma +3 mm links markieren.
- Schalten Sie den Laser aus und bringen Sie einen Aufkleber mit einem Loch mit einem Durchmesser von 4 mm an, das an den oben genannten markierten Koordinaten angebracht ist.
- Injizieren Sie der Maus Bengal Rose (10 μl/g) intraperitoneal. Platzieren Sie den Laserstrahl in 4-5 cm Entfernung vom Schädel, schalten Sie den 561 nm Laser ein und beleuchten Sie den Schädel für 20 min.
- Tragen Sie zwei Tropfen 0,9%ige Kochsalzlösung auf den Schädel auf, um die Wunde zu rehydrieren, nähen Sie die Wunde und legen Sie das Tier in eine Aufwachkammer bei 37 °C, um sich von der Narkose zu erholen. Nach 1 Stunde bringen Sie die Mäuse in ihre Käfige in einem klimatisierten Raum zurück.
- Injizieren Sie 3 Tage nach der Operation alle 12 Stunden eine Analgesie (4 mg/kg Carprofen und 0,1 mg/kg Buprenorphin).