Mausmodell der Inseltransplantation: Eine chirurgische Methode zur Infusion von Pankreasinseln in die Pfortader und zur Vorbeugung postoperativer Blutungen

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Gou, W. et al. Minimierung von Pfortaderblutungen nach der Infusion während der intrahepatischen Inseltransplantation bei Mäusen. J. Vis. Exp. (2021)

In diesem Video beschreiben wir ein Verfahren zur Infusion von Pankreas-Inselzellen in die Leberpfortader, gefolgt von der Anwendung von Gelschaum, um Blutungen erfolgreich zu verhindern. Postoperative Blutungen sind eine häufige Ursache für eine hohe Mortalität bei Inseltransplantationen.

Protokoll

>1. Transplantation von Inselzellen

Induzieren und halten Sie die Maus unter Vollnarkose mit 2% Isofluran. Überprüfen Sie, ob keine Pedalreflexe vorhanden sind, um eine ordnungsgemäße Betäubung des Tieres sicherzustellen.
Rasieren und entfernen Sie das Fell im Bauchbereich der Maus.
Verabreichen Sie eine präoperative Einzeldosis Buprenorphin (0,1 mg/kg i.p.).
Desinfizieren Sie den Operationsbereich mit drei abwechselnden Tüchern mit 2 % Jod und 75 % Alkohol.
Führen Sie eine Laparotomie mit einer Mikroschere durch, um einen 1-1,5 cm langen Schnitt zu erzeugen.
Öffnen Sie die Bauchhöhle mit einem Retraktor. Befolgen Sie entweder Methode A oder Methode B, wie unten beschrieben.

Methode A: (Blutung stoppen mit Gelschaum, Abbildung 1A)

Vorbereitung der Maus
1. Lege eine sterile Gaze um den Schnitt.
2. Ziehen Sie den Darm vorsichtig mit einer Pinzette heraus und halten Sie ihn auf der Gaze.
3. Identifizieren Sie die Pfortader anhand ihrer Lage und legen Sie sie gut frei.
4. Decken Sie den Darm während der gesamten Operation mit einer warmen salzig-feuchten Gaze ab.
Führen Sie die Nadel der vorgeladenen Inselinsulinspritze durch die Pfortader in der Nähe des Zwölffingerdarms ein (Abbildung 1B). Halten Sie dazu die Nadel mit dem Loch (Fase) nach unten und positionieren Sie den Winkel der Öffnungsfläche parallel zur Pfortaderwand, bevor Sie durch die Wand eindringen.
1. Ziehen Sie am Kolben, um etwas Blut (20-50 μl) in die Spritze zu ziehen und zuerst die Inseln zu mischen.
2. Infundiere die Inselzellen langsam in die Pfortader, während du den Tauchgang immer wieder ziehst und drückst.
3. Legen Sie ein Stück Gelschaum (ca. 0,5 cm x 0,5 cm groß), um die Injektionsstelle zu bedecken.
4. Drücken Sie den Gelschaum mit einer Wattespitze nach unten, während Sie die Nadel aus der Pfortader herausziehen.
5. Drücken Sie etwa 2 Minuten lang auf das Gel, um sicherzustellen, dass keine aktive Blutung vorliegt.
6. Rollen Sie die Wattespitze über und weg vom Gelschaum, um sicherzustellen, dass der Gelschaum die Pfortader gut bedeckt.

Methode B: (Blutung stoppen mit Fettpolster, Abbildung 1C)

Legen Sie die Pfortader gründlich frei.
1. Verwende zwei Wattestäbchen, um die freiliegende Pfortader sowohl von der linken als auch von der rechten Seite zu halten.
2. Identifiziere das Fettpolster zwischen dem Zwölffingerdarm und der Pfortader.
3. Dringen Sie durch das Fettpolster, bevor Sie die Nadel in die Pfortader einführen (Abbildung 1D).
4. Ziehen Sie die Inselzellen nach dem ähnlichen Verfahren, das oben in Methode A beschrieben wurde.
5. Ziehe die Nadel heraus und drücke dabei mit einer Wattestäbchen auf das Fett.
6. Drücken Sie nach dem Entfernen der Nadel 1 Minute lang weiter auf das Fettpolster.
Nachdem Sie sich vergewissert haben, dass keine Blutungen aus der Pfortader vorliegen, bringen Sie den Darm vorsichtig in seine ursprüngliche Position in die Bauchhöhle zurück.
Lassen Sie 0,5 ml warme Kochsalzlösung (36-37 °C) vor dem Verschluss in der Bauchhöhle.
Anmerkung: Warme Kochsalzlösung erleichtert die Bewegung und Genesung des Darms nach der Operation und beugt Darmnekrosen vor.
Verschließen Sie die Muskelschicht mit einer 5-0-Naht.
Verschließen Sie die Hautschicht mit einer 4-0-Naht.
Legen Sie die Maus in einen sauberen Käfig auf ein Heizkissen, bis sie sich vollständig von der Narkose erholt hat.
Verabreichen Sie weiterhin alle 12 Stunden ein Analgetikum (z. B. Buprenorphin 0,1 mg/kg i.p.) und 48 Stunden nach der Operation zusätzliche Wärme.
HINWEIS: Die Inseltransplantation dauert ca. 15-20 Minuten.

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Illustration von intrahepatischen Inseltransplantationsverfahren.(A, C). Schematische Darstellung der wichtigsten Schritte, die in Methode A und Methode B verwendet werden. (B, D). Die Inselzellen wurden direkt über die Pfortader (C) oder indirekt über den Fettpat (D) injiziert.