Intakte Eierstockentnahme aus der Maus: Ein chirurgischer Eingriff zur Isolierung des kompletten Eierstocks aus dem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Mason, J. B. et al. Orthotope Ovarialtransplantationsverfahren zur Untersuchung des Einflusses der Lebens- und Gesundheitsspanne der ovariellen Seneszenz bei weiblichen Mäusen. J. Vis. Exp. (2018)

In diesem Video beschreiben wir einen chirurgischen Eingriff, um intakte Eierstöcke aus einem Mausmodell zu gewinnen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Transplantation intakter Eierstöcke an gealterte Mäuse

HINWEIS: Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren, das bei der Übertragung von Eierstöcken von einer jungen Maus (60 Tage alt) auf eine postreproduktive Hündin (12 Monate alt) desselben Inzuchtstammes angewendet wird. Das gleiche Verfahren wird für die Eierstocktransplantation zwischen zwei beliebigen weiblichen Mäusen angewendet.

1. Wiegen und betäuben Sie das Spendertier durch intraperitoneale Injektion (I.P., 27 ga-Nadeln), z. B. mit einem Cocktail aus Ketamin, Xylazin und Acepromazin (65 mg/kg Ketamin, 13 mg/kg Xylazin 2,0 mg/kg, Acepromazin; Cocktaildosis - 6,5 ml/kg). Bringen Sie das Tier in den beheizten Heimkäfig zurück, bis die Narkose gewirkt hat.
2. Nehmen Sie das Tier nach der Betäubung aus dem Käfig und legen Sie es auf erhitzte Papiertücher. Entfernen Sie mit einer Haarschneidemaschine (#40 Klinge bevorzugt) das Haar einige mm lateral zur Mittellinie auf jeder Seite, beginnend knapp unter den Rippen und nach distal, und bereiten Sie einen abgeschnittenen "Fleck" von etwa 2-3 cm im Quadrat auf beiden Seiten der liegenden Maus vor, wobei ein Haarstreifen von etwa 1-2 cm die Mittellinie bedeckt
.
3. Wischen Sie die abgeschnittenen Stellen leicht mit 70% Ethanol ab und tragen Sie Betadinlösung mit einem Wattestäbchen auf die abgeschnittene Stelle auf.
4. Tragen Sie ein antibiotisches Gel zum Augenschutz auf und verabreichen Sie Meloxicam (2,0 mg/kg) subkutan (S.C., 27 ga Nadel) auf die laterale Seite des Halses des Tieres zur postoperativen Schmerzlinderung.
5. Legen Sie das Tier in Bauchlage auf ein beheiztes, steriles Operationsfeld und wischen Sie die abgeschnittene Stelle mit einer 70 % Ethanol getränkten 2 cm x 2 cm Baumwollgaze ab.
6. Machen Sie einen 1,0-1,5 cm langen paralumbalen Schnitt und präparieren Sie die Haut stumpf von der darunter liegenden Faszie. Machen Sie einen weiteren Schnitt durch die Faszie. Präparieren Sie stumpf seitlich unter dieser Faszie so oberflächlich wie möglich, bis Sie die Bauchhöhle erreichen
7. Legen Sie ein kleines OP-Abdecktuch über den Schnitt (schneiden Sie es aus 2 cm x 2 cm Gaze) und befeuchten Sie das Abdecktuch mit steriler Kochsalzlösung.
8. Lokalisieren Sie mit einer kleinen Pinzette das Fettgewebe, das den Eierstock in der Bauchhöhle umgibt, und ziehen Sie das Fettpolster und den Eierstock vorsichtig heraus und legen Sie es auf das benetzte Mulltuch. Das Fettpolster der Eierstöcke erscheint "weißer" als das umgebende Fettgewebe.
9. Platzieren Sie eine 1,5-Zoll-Bulldog-Klemme auf dem Fettpolster (achten Sie darauf, den Eierstockschleimbeutel nicht zu behindern), um den Trakt während des Eingriffs an Ort und Stelle zu halten.
10. Bringen Sie das Präpariermikroskop an seinen Platz und identifizieren Sie den Schleimbeutel der Eierstöcke eindeutig. Fassen Sie den Schleimbeutel mit zwei Uhrmacherzangen und schneiden Sie den Schleimbeutel der Eierstöcke gegenüber dem Hilum der Eierstöcke ein, um den Eierstock freizulegen. Wenn der vorgesehene Zugangsbereich des Schleimbeutels stark vaskularisiert ist, tragen Sie einen Tropfen Adrenalin (1:100.000) mit einer Spritze auf die Schleimbeuteloberfläche auf, um die Blutung zum Zeitpunkt des Reißens zu reduzieren.
11. Entfernen Sie den Eierstock vorsichtig aus dem Schleimbeutel der Eierstöcke und entfernen Sie den Eierstock, indem Sie ihn mit einer Uhrmacherzange am Oberkiefer festklemmen, um Blutungen zu vermeiden.
12. Legen Sie den gespendeten Eierstock in ein Uhrenglas, das mit steriler Kochsalzlösung bei 4° C gefüllt ist, decken Sie ihn locker ab und legen Sie ihn beiseite, bis er für die Transplantation bereit ist.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Präpariermikroskop	Jedes Präparierzielfernrohr mit einstellbarem Arbeitsabstand.
Warmwasser-Umwälzpumpe und passendes Pad für Ihren Operations-/Erholungsbereich.	Stryker/Gaymar	TP700	Zirkulierende Wasserpads erzeugen gleichmäßige und gleichmäßige Betriebs- und Rückgewinnungsfelder.
Chirurgische Instrumente-Präparierinstrumente für den Zugang zum Fortpflanzungstrakt			Die Auswahl der spezifischen chirurgischen Instrumente ist sehr chirurgisch
Nahtmaterial für den Schleimbeutel der Eierstöcke	eNähte	2809G: 9-0 oder 2810G: 10-0 ETHILON SCHWARZ 5" BV130-5 TAPER	10-0-Naht kann schwer zu lokalisieren sein, wenn sie auf das Operationsfeld fallen gelassen wird.
Resorbierbarer Gelatineschwamm	Pfizer	Gelschaum - PFIZER 09-0315-08	Unter sterilen Bedingungen in kleine (~2mm) Stücke schneiden.
Klammern zum Verschluss der Haut	Becton Dickinson	MikRon Autoclip 9mm (BD 427631)
Augensalbe.	MWI Veterinärversorgung Co.		Puralube sterile Augensalbe
Spritzen für Anästhesie, Analgesie und Adrenalin	MWI Veterinärversorgung Co	BD 305536	27 g x 3/8 Zoll, intradermale Abschrägung 1/2 ml
Spritzen für Kochsalzlösung.	MWI Veterinärversorgung Co	BD 309657.	3 ml Spritze, Luer-Lok-Spitze, 27 g Nadel
Haarschneidemaschine/Klinge	Andis	Super AGR+ ™ Akku-Schermaschine mit abnehmbarer Klinge und eine CeramicEdge® #40-Klinge.	Alle Haarschneidemaschinen mit einer feinen Klinge.
Ethanol	Universitäre Chemieversorgung		Zur Verwendung auf 70% verdünnen.
Betadin-Lösung	MWI Veterinärversorgung Co.	Nr. 3233
2x2 Mullbinden	MWI Veterinärversorgung Co.	3073	autoklaviert mit OP-Packungen
Borosilikatglasperlen	Sigma-Aldrich Co	Z273619	Autoklav in Sintilationsfläschchen
4-Vinylcyclohexendiepoxid	Sigma-Aldrich Co.	Artikel-Nr.: 94956