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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Präparation von Mäusen und Anlegen eines Katheters in die Halsvene
HINWEIS: Hier wurden männliche oder weibliche, 5-7 Wochen alte mTmG-Reportermäuse (B6.129(Cg) Gt(ROSA)26Sortm4(ACTBtdTomato,-EGFP)Luo10) verwendet, die mit Pf4-cre-Mäusen gekreuzt wurden, was eine intensive grüne Fluoreszenzmarkierung in Megakaryozyten und Blutplättchen ermöglichte. Bevor Sie mit dem Experiment beginnen, heizen Sie die Heizkammer des Mikroskops einige Stunden lang vor.
- Transportieren Sie die Maus in den Bildgebungsraum und fahren Sie mit der Anästhesie fort.
- Betäuben Sie die Maus durch intraperitoneale (i.p.) Injektion einer Lösung aus Ketamin (Ketamin (100 μg/g) und Xylazin (10 μg/g) (5 μL/g).
Anmerkung: Die wiederholte Verabreichung von Ketamin/Xylazin wird hier angewendet und funktioniert gut, erfordert jedoch die Unterbrechung der Aufzeichnung für eine regelmäßige Reinjektion. Alternativ, wenn ein Anästhesiegerät zur Verfügung steht, kann die Induktion der Anästhesie mit Ketamin/Xylazin durchgeführt und anschließend unter Inhalation von Gasen (Gemisch aus Isofluran, Luft und Sauerstoff) aufrechterhalten werden.
- Setzen Sie das Tier in seinen Käfig ein, bis es eine tiefe Narkose erreicht. Stellen Sie die Maus für alle nachfolgenden Manipulationen auf eine erhitzte Platte, die auf 37 °C erwärmt ist.
Anmerkung: Während das Tier eine tiefe Narkose erreicht, schalten Sie das Mikroskop und alle Geräte ein und stellen Sie die verschiedenen Parameter ein, die erforderlich sind, um das Experiment nach Abschluss der Operation zu starten. Hier dauert der Eingriff nur 3 Stunden und ist endgültig. Die Maus wird nach dem Experiment eingeschläfert, ohne aufzuwachen. Daher ist eine Ethanol-Desinfektion für Haut und Instrumente ausreichend. Abhängig von den institutionellen Richtlinien oder wenn der Eingriff länger dauern würde, sollten jedoch vollständigere Desinfektionsmethoden verwendet werden, wie z. B. drei abwechselnde Peelings mit Betadin/Povidon und Alkohol.
2. Lege einen Katheter in die Halsvene ein.
HINWEIS: Es ist wichtig, mikrobielle Kontaminationen während der Operation so weit wie möglich zu vermeiden. Achten Sie darauf, die Haut sorgfältig mit 70%igem Ethanol (EtOH) zu desinfizieren, bevor Sie mit der Operation fortfahren. Verwenden Sie immer sterilisierte Scheren und Pinzetten und spülen Sie sie regelmäßig mit 70% EtOH aus. Arbeiten Sie an einem sauberen Ort und tragen Sie einen Mund-Nasen-Schutz. Ein 22-G-Katheter "über der Nadel", bestehend aus einer Nadel in einem Kunststoffschlauch, wird für die intravenöse Injektion verwendet (siehe Materialtabelle).
- Legen Sie die Maus auf den Rücken und fixieren Sie die vorderen Beine mit chirurgischem Klebeband, um den Hals zu dehnen (Abbildung 1A). Desinfizieren Sie den Hals mit 70%igem Ethanol.
Anmerkung: Der Einfachheit halber kann der Hals vor der Operation rasiert werden. Wenn der Eingriff länger dauert, muss eine sorgfältige Rasur durchgeführt werden, um die richtige aseptische Technik zu gewährleisten.
- Machen Sie mit einer sterilen Schere einen 0,7-1 cm langen Schnitt über der rechten oder linken Halsvene. Dehnen Sie das angrenzende Bindegewebe, um die Vena jugularis externa und die Spitze des Brustmuskels freizulegen (Abbildung 1A).
- Füllen Sie den Katheter mit warmer, steriler physiologischer Kochsalzlösung. Führen Sie den Katheter in die Vene ein, nachdem Sie durch den Brustmuskel eingedrungen sind (Abbildung 1B).
Anmerkung: Achten Sie darauf, Luftblasen im Inneren des Katheters zu vermeiden. Es ist wichtig, den Katheter durch den Muskel einzuführen, um Blutungen zu vermeiden, da der Muskel einen Kompressionspunkt bildet. Selbst Mäuse mit Hämostasedefekten, wie z.B. Itgb3-/- Mäuse, bluten bei diesem Ansatz nicht beim Einführen des Katheters.
- Entfernen Sie vorsichtig die Nadel und führen Sie den Katheter bei Bedarf vorsichtig tiefer in die Vene ein. Schließen Sie die Spritze an und stabilisieren Sie den Katheter durch Zugabe eines Tropfens chirurgischen Klebers (Materialtabelle).
Anmerkung: Es ist möglich, einen Katheter in die Schwanzvene einzuführen, obwohl dies etwas Übung erfordert, da die Vene ein kleineres Kaliber hat. Dies ist besonders schwierig bei Mäusen mit dunklen Haaren, deren Schwanzvene kaum sichtbar ist. Aufgrund des größeren Kalibers kann die Positionierung des Katheters in der Jugularvene eine zuverlässigere Injektion größerer Volumina oder wiederholter Behandlungen ermöglichen. Bitte beachten Sie, dass die Spritze zum ersten Mal mit warmer Kochsalzlösung gefüllt wird, und vergessen Sie nicht, das Totvolumen vor der Injektion der Arzneimittellösung zu injizieren.
- Bringen Sie die Maus vorsichtig wieder in eine Bauchlage (Abbildung 1C). Tragen Sie das Gel (Materialtabelle) auf die Augen auf, um Trockenheit zu verhindern.
