Installation eines intravitalen Pankreas-Bildgebungsfensters im Mausmodell: Ein integriertes Pankreas-Bildgebungsfenster für die In-vivo-Bildgebung der murinen Pankreas-Mikrostruktur

Zusammenfassung

Quelle: Park, I. et. al. Stabilisierte longitudinale In-vivo-Visualisierung der Bauchspeicheldrüse auf zellulärer Ebene in einem Mausmodell mit einem intravitalen Bildgebungsfenster der Bauchspeicheldrüse. J. Vis. Exp. (2021)

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Implantation eines Pankreas-Bildgebungsfensters, um die Bauchspeicheldrüse vom Darm für eine hochauflösende Längszeitraffer-Bildgebung der Pankreas-Mikrostruktur zu trennen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Chirurgie

1. Bereiten Sie eine sterile Operationsplattform vor und sterilisieren Sie die Oberflächen mit 70% Ethanol.|
   Anmerkung: Für longitudinale Bildgebungssitzungen ist die aseptische Technik unerlässlich.
2. Betäuben Sie Mäuse mit einer Mischung aus Tiletamin/Zolazepam (30 mg/kg) und Xylazin (10 mg/kg).
   Anmerkung: Die Verwendung von Tiletamin/Zolazepam wird anstelle von Ketamin empfohlen, da es eine nachteilige Wirkung von Hyperglykämie hat. Für den Zweck des Experiments sollte die optimale Anästhesie ausgewählt werden.
3. Überwachen Sie die Körpertemperatur mit einer rektalen Sonde mit einem homöotherm gesteuerten Heizkissen.
4. Rasieren Sie die linke Flanke der Maus und tragen Sie drei Runden abwechselnd Peeling auf Alkohol- und Jodbasis auf.
   Anmerkung: Wenn Enthaarungscreme verwendet wird, lassen Sie sie nicht länger als 1 Minute einwirken, um Verätzungen zu vermeiden.
5. Machen Sie einen 1,5 cm langen Schnitt an der linken Flanke der Maus und präparieren Sie die Haut und den Muskel.
6. Führen Sie eine Naht an der Handtasche mit einer Naht in Schwarz oder Nylon 4-0 am Inzisionsrand durch.
7. Verwenden Sie einen Mikro-Retraktor am Schnitt und legen Sie die Milz vorsichtig frei.
8. Bündeln Sie die Milz vorsichtig mit einer Ringzange und identifizieren Sie die Bauchspeicheldrüse.
9. Platzieren Sie das Fenster an der Flanke der Maus und führen Sie Milz und Bauchspeicheldrüse durch den offenen Raum des Fensters. Die Manipulation der Bauchspeicheldrüse muss sehr vorsichtig sein, da sie zu Blutungen oder Pankreatitis führen kann.
   Anmerkung: Individuelle Gestaltung des intravitalen Bildgebungsfensters der Bauchspeicheldrüse, um die Bauchspeicheldrüse vom Darm in der Bauchhöhle zu trennen (Abbildung 1A, B).
10. Legen Sie die Bauchspeicheldrüse vorsichtig auf die Platte des Bildgebungsfensters, die Milz wird auf den freien Raum des Fensters gelegt.
11. Tropfen N-Butylcyanacrylat-Kleber auf den Rand des Bildfensters auftragen.
    1. Um die Menge des aufgetragenen Klebers zu minimieren, verwenden Sie für die Anwendung eine 31 G Katheternadel. Wenn die Menge des Tropfens groß ist, haftet das Gewebe unbeabsichtigt an der Fenster- oder Abdeckscheibe.
12. Bringen Sie vorsichtig ein rundes 12-mm-Deckglas am Rand des Bildfensters an.
13. Ziehen Sie die Nahtschlaufe so, dass sie in die seitliche Rille des Fensters passt, und binden Sie sie dreimal fest.
14. Schneiden Sie die maximale proximale Stelle des Knotens ab, um die Unterbrechung der engen Nähte zu verhindern, wenn diese Mäuse wach sind.
15. Lassen Sie die Mäuse sich von der Anästhesie erholen (2-3 Stunden) und injizieren Sie Ketoprofen (5 mg/kg, subkutan in die lose Haut an der Basis des Halses oder der Hüfte des Tieres) zur Schmerzlinderung. Untersuchen Sie alle 12 Stunden erneut auf Anzeichen von Schmerzen und Ketoprofen sollte alle 24 Stunden für 1-3 Tage in Betracht gezogen werden.
    Anmerkung: Die Analgesie beeinflusst die Insulinsekretion als Reaktion auf Glukose. Die Wahl und der Zeitpunkt der Analgesie müssen für den Versuchszweck individuell angepasst werden.
16. Bringen Sie die Maus mit ausreichend Einstreu in den Käfig, um den Kontakt des Fensters mit dem Käfig zu vermeiden. Vermeiden Sie es, das Haus mit den Mäusen zu beherbergen, ohne das Fenster zu operieren.

Ergebnisse

Abbildung 1. Design und Foto des intravitalen Bildgebungsfensters der Bauchspeicheldrüse. (A) Eine 3D- und Querschnittsansicht des intravitalen Bildgebungsfensters der Bauchspeicheldrüse. (B) Vorderes und hinteres Foto des Pankreas-Bildgebungsfensters.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Deckgläser rund	Marienfeld	Artikel-Nr.: 111520	Deckglas für das Pankreas-Bildgebungsfenster
IRIS Schere	VERIFIZIERTER LIEFERANT - JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Nr. S-1107-10	Dieses Produkt kann durch das Produkt eines anderen Unternehmens ersetzt werden
Loctite 401	Henkel	Nr. 401	N-Butylcyanacrylat-Kleber
Micro Nadelhalter	VERIFIZIERTER LIEFERANT - JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Nr. H-1126-10	Dieses Produkt kann durch das Produkt eines anderen Unternehmens ersetzt werden
Mikro-Retraktor	VERIFIZIERTER LIEFERANT - JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Nr. 17004-03	Dieses Produkt kann durch das Produkt eines anderen Unternehmens ersetzt werden
Mikrozange	VERIFIZIERTER LIEFERANT - JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Nr. F-1034	Dieses Produkt kann durch das Produkt eines anderen Unternehmens ersetzt werden
Nylon 4-0	AILEE	NB434	Nicht resorbierbares Nahtmaterial
Omnican N 100 30G	B BRAUN	FT9172220S	Verwenden Sie für Gefäßkatheter nur den Nadelteil
Fenster für die Bildgebung der Bauchspeicheldrüse	Geumto Engineering	Sonderanfertigung	Pankreas-Bildgebungsfenster - Sonderanfertigung
Physiosuite	Kent Scientific	PS-02	Homöothermer Temperaturregler
Ringzange	VERIFIZIERTER LIEFERANT - JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Nr. F-1090-3	Dieses Produkt kann durch das Produkt eines anderen Unternehmens ersetzt werden
Rompun	Bayer	Rompun	Betäubungsmittel
Zoletil	Virbac	Zoletil 100	Betäubungsmittel
BALB/C Nackt	OrientBio	BALB/C Nackt	BALB/C Nackt