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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Bildgebendes Verfahren
- Legen Sie die Maus zur Gasanästhesie in eine Induktionskammer und geben Sie 3% Isofluran in reinem Sauerstoff, bis das Tier vollständig betäubt ist. Überprüfen Sie die Tiefe der Anästhesie, indem Sie nicht auf das Kneifen der Pfote reagieren.
- Bringen Sie das Tier auf ein beheiztes Brett - ein Bestandteil der UHFUS-Bildgebungsstation - und halten Sie das Tier in Rückenlage. Verwenden Sie eine mit Vaseline geschmierte Rektumsonde, um die Körpertemperatur zu messen. Passen Sie die Temperatur der Platte an, um die Körpertemperatur der Maus im physiologischen Bereich (36 ± 1 °C) zu halten.
- Befeuchten Sie die Augen der Maus mit Tierarztsalbe, um Trockenheit während der Narkose zu vermeiden. Versorgen Sie das Betäubungsmittel (1,5 % Isofluran in reinem Sauerstoff) durch die Nasenmaske einer Maus. Passen Sie den Prozentsatz an Isofluran an, um die richtige Anästhesietiefe beizubehalten.
- Bestreichen Sie die Vorder- und Hinterpfoten mit leitfähiger Paste und kleben Sie sie auf die in die Platine eingelassenen EKG-Plattenelektroden. Überprüfen Sie, ob die physiologischen Parameter (Herzfrequenz, Atmungssignal und Körperkerntemperatur) korrekt erfasst und angezeigt werden.
- Entfernen Sie die Haare aus beiden Leistenbereichen mit einem Enthaarungsmittel und beschichten Sie sie mit einem akustischen Kopplungsmedium.
- Klemmen Sie die UHFUS-Linearsonde (40 MHz Mittenfrequenz) in einen speziellen 3D-Motor ein, der in die UHFUS-Bildgebungsstation eingebettet ist und eine automatisierte und schrittweise Bewegung der Sonde ermöglicht.
- Richten Sie die Position der Ultraschallsonde richtig aus und passen Sie sie an, um Bilder der kurzen Achse des Leistenlymphknotens (links/rechts) zu erhalten, und platzieren Sie den interessierenden Bereich in der Fokuszone.
- Scannen Sie das gesamte Volumen des Leistenlymphknotens als Sequenz von 2D-B-Modus-Bildern, wie zuvor beschrieben. Erfassen Sie Bilder auf mehreren Ebenen des Lymphknotens durch lineare Bewegung des Schallkopfs mit Schrittweiten auf einer Mikrometerskala, um 3D-Daten in Form von automatisch atmungs- und herzgesteuerten Cine-Schleifen zu generieren.
- Stellen Sie die Bildaufnahme mit folgenden Parametern ein: Scanabstand zwischen 2 und 5 mm (abhängig von der Lymphknotengröße); Schrittweite 44 μm, mit einem Ergebnis von 46-114 Scanschritten/Lymphknotenschnitten und einer Erfassungszeit von 1-3 min pro Tier. Speichern Sie die aufgenommenen Bilder digital im RAW-Format (DICOM) für weitere Offline-Analysen.