Extraktion eines Netzhautbechers aus der Maus: Ein chirurgischer Eingriff zur Gewinnung eines intakten Netzhautbechers aus einem Mausauge

Zusammenfassung

Quelle: Jiang, K. et al. Bestimmung der mitochondrialen Atmung und Glykolyse in ex vivo Netzhautgewebeproben. J. vis. exp (2021)

Dieses Video beschreibt ein Protokoll, um den Netzhautbecher ohne die äußeren Deckschichten aus dem Augapfel einer Maus zu isolieren. Das extrahierte Netzhautgewebe kann helfen, verschiedene Stoffwechselwege zu untersuchen, die in den Netzhautzellen ablaufen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Dissektion der Netzhautschale

1. Euthanasieren Sie eine Maus durch CO₂ -Erstickung gemäß den institutionellen Richtlinien zur Euthanasie.
   Anmerkung: Lassen Sie das Tier nicht länger als für die Euthanasie benötigte Zeit in einer CO₂ -Kammer.
2. Augen enukleieren und in eisalten 1x PBS-Puffer in einer Petrischale geben und dann unter ein Präpariermikroskop legen.
3. Entfernen Sie vorsichtig mit einer Mikroschere die zusätzlichen Rektusmuskeln, die außerhalb des Augapfels befestigt sind, und schneiden Sie den Sehnerv ab.
4. Stanzen Sie mit einer 30-G-Nadel ein Loch in den Rand der Hornhaut (Limbus), das als Einstichstelle für die Mikroschere dient. Machen Sie dann mit einer feinen Präpariermikroschere einen kreisförmigen Schnitt entlang des Randes der Hornhaut, der sie von der hinteren Augenmuschel trennt.
5. Verwenden Sie eine scharfe Präparierzange, um die Hornhaut, die Linse und den Glaskörper von der Augenmuschel zu entfernen.
6. Machen Sie mit einer feinen Präpariermikroschere mehrere kleine Schnitte an der Skleraschicht am Rand der Augenmuschel. Vermeiden Sie es, die Netzhautschicht zu durchtrennen. Verwenden Sie zwei scharfe Präparierzangen, um das Skleralgewebe an jeder Seite des Schnitts festzuhalten, und ziehen Sie sehr vorsichtig an der Skleralschicht, um sie von der Neuralnetzhaut zu entfernen. Wiederholen Sie dies um die Augenmuschel herum, bis alle Sklera entfernt ist und eine intakte Netzhautschale erhalten wird.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
1X PBS	Thermo Fischer	Nr. 14190-144
30-Gauge-Nadel	BD Präzisions-Gleiten	305106
Biopsiestanzer, 1 mm	Integra Miltex	33-31AA
CO2-Erstickungskammer
Präparierzange-Dumont #5	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 11251-10	Stright Tipp
Präparierzange-Dumont #7	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 11274-20	Gebogene Spitze
Mikroskop zum Sezieren
Graefe-Zange	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 11051-10	Gebogene, gezackte Spitze
Mikroschere	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 15004-08	Gebogene Spitze