Apikale Resektion eines Neugeborenen-Mausmodells: Ein chirurgisches Verfahren zur Amputation der ventrikulären Spitze zur Untersuchung des regenerativen Potenzials in einem neu geborenen Mausherz

Zusammenfassung

Quelle: Li, Y. et al. Transplantation von neonatalen Maus-Herzmakrophagen in erwachsene Mäuse. J. Vis. Exp. (2021).

In diesem Video demonstrieren wir das Verfahren zur chirurgischen Entfernung der linksventrikulären Spitze eines neugeborenen Mausherzens.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Apikale Resektionsoperation bei Neugeborenen 1 Tag alter Cx3cr1 ^GFP/+ Maus (C57BL/6 Hintergrund)

1. Anästhesie
   1. Nehmen Sie alle Mäusewelpen aus den Käfigen und legen Sie sie in eine saubere, trockene Box.
   2. Betten Sie jede Maus für ca. 2-3 Minuten in das Eis ein. Stellen Sie sicher, dass sich zwischen dem Eis und dem Mäusewelpen eine dünne Barriere wie Latex oder Gaze befindet, um Erfrierungen zu vermeiden.
   3. Identifizieren Sie eine ausreichende Anästhesie, indem Sie auf die folgenden Anzeichen achten: blasse Haut, mangelnde Bewegung der Gliedmaßen und fehlender Pedalreflex
   .
2. Thorakotomie
   1. Kühlen Sie die Bronze-Operationsplattform über Nacht bei -20 °C vor, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten.
   2. Nehmen Sie die betäubte Maus aus der Eisbox und setzen Sie sie auf eine Operationsplattform aus Bronze. Verankern Sie die Maus in Rückenlage mit medizinischem Klebeband auf der Operationsplattform.
   3. Legen Sie die Bedienplattform mit der Maus darauf unter ein Stereoskop.
   4. Desinfizieren Sie die Brust der Maus mit einem mit Betadin und 70 % Alkohol getränkten Vorbereitungspad oder in Übereinstimmung mit den institutionellen Richtlinien.
   5. Schneiden Sie die Haut mit einem 1 cm langen Schnitt im vierten Interkostalbereich der Brusthöhle ein und trennen Sie dann die Interkostalmuskulatur mit einer mikrochirurgischen Schere, bis das Herz zugänglich ist.
   6. Drücken Sie abwechselnd mit Hilfe von zwei Zangen auf Brust und Bauch, bis das Herz ohne mechanische Beschädigung aus dem Brustkorb herausragt.
   7. Setzen Sie die Rippen unterhalb und oberhalb des kleinen Schnitts als natürliche Fixierung an, um das Herz ruhig zu stellen.
3. Resektion der ventrikulären Spitze
   1. Lokalisieren Sie die Spitze des linken Ventrikels. Schneiden Sie ein ventrikuläres Apexgewebe mit einem Durchmesser von 1 mm mit einer Iridektomieschere unter einem Stereoskop.
   2. Vergewissern Sie sich, dass die linksventrikuläre Kammer freiliegt und beginnen Sie zu nässen.
   3. Drücken Sie das Herz mit einem Wattestäbchen vorsichtig zurück in die Brusthöhle.
   4. Nähen Sie die Muskeln, Rippen und die Haut mit 8-0 Prolen-Nähte.
   5. Reinigen Sie die Maus nach der Operation gründlich.
4. Nachsorge nach der Operation
   1. Übertragen Sie die Maus von der Bedienplattform auf eine 37 °C heiße Heizdecke, um den Körper unmittelbar nach der Operation aufzuwärmen.
   2. Bestätigen Sie die Anabiose der Maus, indem Sie auf die folgenden Anzeichen achten: Wiederherstellung der spontanen Atmung, Veränderung der Hautfarbe von blass zu rosa und Bewegung der Gliedmaßen.
   3. Bringen Sie die bediente Maus zurück zu ihrer Mutter, sobald sie sich erholt hat.
   4. Mischen Sie die operierte Maus bei Bedarf mit dem Nistmaterial ihrer Mutter.
      Anmerkung: Es ist wichtig, alle 1 Tag alten Welpen auf einmal von der Mutter zu nehmen und sie dann alle auf einmal zurückzugeben, nachdem alle Welpen wiedergefunden wurden.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Herzdissoziationsset für Neugeborene	Miltenyi Bio Tech, Teterow, Deutschland	130-098-373