Modell des Mausschwanz-Lymphödems: Eine In-vivo-Technik zur Erzeugung eines anhaltenden Lymphödems beim Mausschwanz

Zusammenfassung

Quelle: Hassanein, A. H. et al., Ein Mausschwanz-Lymphödem-Modell. J. Vis. Exp. (2021).

Dieses Video beschreibt eine in vivo-Technik zur Erzeugung eines murinen Schwanzlymphödems, einer abnormalen Flüssigkeitsansammlung im interstitiellen Geweberaum, die zu einer Schwellung im Schwanz führt. Das Modell wird zur Untersuchung von Mechanismen und Therapien bei Lymphödemen eingesetzt.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Chirurgische Störung der Schwanzlymphgefäße von Mäusen

1. Verwenden Sie acht Wochen alte C57BL/6-Mäuse mit gleicher Geschlechterverteilung.
2. Legen Sie eine Maus unter Vollnarkose in eine Induktionskammer mit 3-4 % Isofluran in 100 % Sauerstoff, gefolgt von einer Erhaltungssedierung von 1-3 % während des Eingriffs.
3. Zur Schmerzkontrolle ist 0,5 mg/kg Buprenorphin mit verzögerter Freisetzung (SR) subkutan zu verabreichen.
   Anmerkung: Zusätzliche Schmerzmittel, die nach der Operation verabreicht werden: Carprofen einmal alle 24 Stunden für mindestens 48 Stunden und Bupivacain einmal entweder nach dem Schnitt oder vor dem Schließen des Schnittes, aufgetragen durch Tropfen auf die Hautränder (hält bis zu 4 – 6 Stunden).
4. Positionieren Sie die Maus nach hinten und bereiten Sie den Schwanz mit 70%igem Isopropylalkohol vor.
5. Messen Sie den Schwanzdurchmesser vor dem Eingriff in Schritten von 5 mm, beginnend 20 mm von der Basis des Schwanzes entfernt, mit einem Messschieber. Diese Messungen werden verwendet, um das Volumen unter Verwendung der Kegelstumpfgleichung zu berechnen.
6. Markieren Sie eine 3 mm umlaufende Exzision am Schwanz 20 mm von der Basis entfernt.
7. Führen Sie eine sorgfältige Hautexzision von 3 mm in voller Dicke mit einer sterilen chirurgischen Klinge (Größe 15) durch, wobei das gesamte darunter liegende Gefäßsystem unter chirurgischer mikroskopischer Vergrößerung intakt bleibt. Schneiden Sie die obere Umfangsmarkierung (20 mm vom Schwanzansatz entfernt) zuerst durch die Dermis, gefolgt von einem umlaufenden Schnitt in voller Dicke 3 mm distal des ersten Schnitts
   1. Machen Sie einen senkrechten vertikalen Schnitt in voller Dicke, um die beiden Einschnitte zu verbinden. Verwenden Sie einen gezahnten feinen Tonabnehmer, um eine Eintrittskante zu greifen, und verwenden Sie eine Mikroschere, um vorsichtig tief in der avaskulären Ebene bis zur Dermis und oberflächlich bis zur Venenadventitia zu präparieren.
8. Injizieren Sie 0,1 ml Isosulfanblau (1%) subkutan proximal zur Schwanzspitze.
9. Identifizieren Sie die beiden Lymphkanäle, die an die seitlichen Schwanzvenen angrenzen, unter dem Operationsmikroskop. Die Lymphgefäße erscheinen aufgrund der Isosulfan-Injektion blau. Durchtrennen Sie die Lymphgefäße mit einer geraden mikrochirurgischen Schere. Benutzen Sie die Schere, um vorsichtig eine Ebene zwischen der Seitenvene und der Lymphe zu präparieren. Führen Sie dann die Spitze einer Scherenklinge zwischen das Lymphgefäß und die Seitenvene und schließen Sie die Klingen, um das Lymphgefäß zu durchtrennen.
10. Verbinden Sie die Schwanzwunde mit einem steril haftenden Klarsichtverband. Überprüfen Sie die postoperativen Schnitte täglich, um sicherzustellen, dass sie nicht infiziert sind oder bluten, und versorgen Sie die Wunden 2 Wochen lang.
11. Halten Sie die Tiere einzeln, um weitere Verletzungen des Schwanzes zu vermeiden und zu verhindern, dass sich die Tiere gegenseitig beißen, was zu chirurgischen Komplikationen führen würde.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Operationsmikroskop	Leica, Wetzlar, Deutschland	MSV266
Adhärenter Verband (Tegaderm)	3M, St. Paul, Minnesota.	1626W
C57BL/6 Mäuse	Jackson Laboratorien	664
Micro-Adson-Pinzette - 1x2 Zähne	Fine Science Tools (USA) Inc.	Nr. 11019-12
Einweg-Nadel 30GX1	Fischer Scientific	305128
Bedienungsschere	Fischer Scientific	Tel.: 12-460-796
IsosulfanBlue (Lymphazurin) 50mg/5ml	Mylan	Artikel-Nr.: 67457-220-05

kg