Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE Veterinärprüfungsausschuss überprüft.
>1. Vorbereitung und Positionierung des Laserdopplers
- Bereiten Sie eine Halterung für die Laser-Doppler-Sonde vor, indem Sie die Spitze einer 10 μL Pipettenspitze (3-5 mm Länge) abschneiden.
Anmerkung: Alle Instrumente werden mit einem Heißperlensterilisator sterilisiert. Auch die Oberflächen werden vor und nach der Operation mit einem mikrobiellen Desinfektionsspray desinfiziert. Vor der Operation werden die Bereiche um Kopf und Brust von Mäusen mit einem Wunddesinfektionsspray desinfiziert.
- Injizieren Sie der Maus 30 Minuten vor der Operation eine Analgesie (4 mg/kg Carprofen und 0,1 mg/kg Buprenorphin, intraperitoneal).
- Betäuben Sie die Maus, indem Sie sie in die Induktionskammer mit einer Isofluran-Flussrate von 4% legen, bis die spontanen Körperbewegungen und Vibrissen aufhören.
- Platzieren Sie die Maus in Bauchlage im Operationsbereich mit der Nase in der Anästhesiemaske. Halten Sie die Isoflurankonzentration für eine weitere Minute bei 4 %, reduzieren Sie sie dann und halten Sie sie bei 2 %.
- Stellen Sie das zugehörige rückkopplungsgesteuerte Heizkissen ein, um die Körpertemperatur der Maus auf 37 °C zu halten, und führen Sie die Rektalsonde vorsichtig ein, um die Temperatur während des gesamten chirurgischen Eingriffs zu überwachen.
- Tragen Sie Dexpanthenol-Augensalbe auf beide Augen auf.
- Desinfizieren Sie die Haut und die Haare rund um das linke Auge und Ohr mit 70% Ethanol.
- Schneiden Sie die Kopfhaut zwischen dem linken Ohr und dem Auge (1 cm lang) ein, um den Schädelknochen freizulegen.
- Schneiden Sie den Schläfenmuskel ab und ziehen Sie ihn zurück, um die MCA unter dem Schädel sichtbar zu machen.
- Befestigen Sie den äußeren Teil der Spitze, mit der die Laser-Doppler-Sonde/-Faser auf dem linken MCA gehalten wird, mit Klebstoff mit Kleber. Kleben Sie dann die Haut zusammen, um die Wunde um den Spitzenhalter zu schließen. Tragen Sie 2-3 Tropfen Härterkleber auf, um den Prozess zu beschleunigen. Achten Sie darauf, dass die Laser-Doppler-Faser nicht verklebt ist und sich jederzeit leicht vom Spitzenhalter entfernen lässt.