$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE Veterinärprüfungsausschuss überprüft.
>1. Vorbereitung des Materials und der Instrumente
- Schließen Sie die Wärmedecke an, um die Temperatur des Operationsbereichs und die Körpertemperatur der Maus während der Narkose auf 37 °C zu halten.
- Autoklaven Sie Scheren und Pinzetten, bereiten Sie 70%ige Ethanollösung vor und halten Sie Dexpanthenol-Augensalbe, mehrere Stücke Baumwolle und 5-0 beschichtetes geflochtenes Polyesternaht griffbereit. Bereiten Sie eine 1-ml-Spritze mit 0,9%iger Kochsalzlösung (ohne Nadel) vor, um die Inzisionsstelle des Tieres mit Feuchtigkeit zu versorgen. Bereiten Sie das Anästhesiegas (100% O2 + Isofluran) vor.
- Bereiten Sie eine Halterung für die Laser-Doppler-Sonde vor, indem Sie die Spitze einer 10-μl-Pipettenspitze (3-5 mm Länge) abschneiden.|
HINWEIS: Alle Instrumente werden mit einem Heißperlensterilisator sterilisiert. Auch die Oberflächen werden vor und nach der Operation mit einem mikrobiellen Desinfektionsspray desinfiziert. Vor der Operation werden die Bereiche um Kopf und Brust von Mäusen mit einem Wunddesinfektionsspray desinfiziert.
>2. Vorbereitung des Laserdopplers
- Injizieren Sie der Maus 30 Minuten vor der Operation eine Analgesie (4 mg/kg Carprofen und 0,1 mg/kg Buprenorphin, intraperitoneal).
- Betäuben Sie die Maus, indem Sie sie in die Induktionskammer mit einer Isofluran-Flussrate von 4% legen, bis die spontanen Körperbewegungen und Vibrissen aufhören.
- Platzieren Sie die Maus in Bauchlage im Operationsbereich mit der Nase in der Anästhesiemaske. Halten Sie die Isoflurankonzentration für eine weitere Minute bei 4 %, reduzieren Sie sie dann und halten Sie sie bei 2 %.
- Stellen Sie das zugehörige rückkopplungsgesteuerte Heizkissen ein, um die Körpertemperatur der Maus auf 37 °C zu halten, und führen Sie die Rektalsonde vorsichtig ein, um die Temperatur während des gesamten chirurgischen Eingriffs zu überwachen.
- Tragen Sie Dexpanthenol-Augensalbe auf beide Augen auf.
- Desinfizieren Sie die Haut und die Haare rund um das linke Auge und Ohr mit 70% Ethanol.
- Schneiden Sie die Kopfhaut zwischen dem linken Ohr und dem Auge (1 cm lang) ein, um den Schädelknochen freizulegen.
- Schneiden Sie den Schläfenmuskel ab und ziehen Sie ihn zurück, um die MCA unter dem Schädel sichtbar zu machen.
- Befestigen Sie den äußeren Teil der Spitze, mit der die Laser-Doppler-Sonde/-Faser auf dem linken MCA gehalten wird, mit Klebstoff mit Kleber. Kleben Sie dann die Haut zusammen, um die Wunde um den Spitzenhalter zu schließen. Tragen Sie 2-3 Tropfen Härterkleber auf, um den Prozess zu beschleunigen. Achten Sie darauf, dass die Laser-Doppler-Faser nicht verklebt ist und sich jederzeit leicht vom Spitzenhalter entfernen lässt.
>3.Transientes MCAo-Modell (Okklusion)
- Drehen Sie die Maus in die Rückenlage. Stecken Sie die Schnauze in den Anästhesiekonus und fixieren Sie die Pfoten mit Klebeband.
- Desinfizieren Sie die Haut und die Haare rund um die Brust und machen Sie einen 2 cm langen Schnitt in der Mittellinie im Nacken.
- Ziehen Sie mit einer Pinzette die Haut und die Unterkieferdrüsen auseinander. Verwenden Sie Retraktoren, um den M. sternomastoideus zu halten, das Operationsfeld freizulegen und die linke Arteria carotis communis (CCA) zu finden. Präparieren Sie das CCA frei von Bindegewebe und umgebenden Nerven (ohne den Vagusnerv zu schädigen) und führen Sie vor der Bifurkation eine transiente Ligatur durch.
- Präparieren Sie die Arteria carotis externa (ECA) und binden Sie einen dauerhaften Knoten an der distalsten sichtbaren Stelle. Legen Sie eine weitere Naht unter die ECA, in der Nähe der Bifurkation, und bereiten Sie einen losen Knoten für die spätere Verwendung vor.
- Präparieren Sie die Arteria carotis interna (ICA) und platzieren Sie einen mikrovaskulären Clip darauf, 5 mm über der Bifurkation. Achten Sie darauf, den Vagusnerv nicht zu beschädigen.
- Schneiden Sie ein kleines Loch in die ECA zwischen der engen und der losen Ligatur; achten Sie darauf, nicht die gesamte ECA zu durchtrennen.
- Führen Sie das Filament ein und schieben Sie es in Richtung CCA. Ziehen Sie die lose Ligatur in der ECA um das Lumen fest, um das Filament kurzzeitig in dieser Position zu fixieren und Blutungen beim Entfernen des mikrovaskulären Clips zu vermeiden.
- Entfernen Sie den mikrovaskulären Clip und führen Sie das Filament durch den ICA ein, bis der Ursprung des MCA erreicht ist, indem Sie eine starke Verringerung (>80%) des zerebralen Blutflusses feststellen, die mit dem Laserdoppler gemessen wurde. Fixiere das Filament in dieser Position, indem du den Knoten um den ECA weiter festziehst.
Anmerkung: Wenn sich das Filament in die richtige Richtung bewegt, bewegt es sich reibungslos voran und es sollte kein Widerstand beobachtet werden.
- Erfassen Sie Laser-Doppler-Werte vor und nach dem Einsetzen des Filaments.
- Entfernen Sie den Retraktor und verlagern Sie den M. sternomastoideus und die Unterkieferdrüsen, bevor Sie die Wunde vernähen. Entfernen Sie die Laser-Doppler-Sonde und legen Sie das Tier für 1 h (bis zur Filamententfernung) bei 37 °C in eine Auffangkammer.