Koloskopisch geführte Pinch-Biopsie in einem Mausmodell: Eine Technik zur Visualisierung und Extraktion von Gewebeproben aus dem Dickdarm der Maus

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Koloskopie und Wundinduktion

1. Montieren Sie die Komponenten des Endoskops vor, indem Sie zuerst das Endoskop mit 1,9 mm starrer Bohrung in die Hülle einführen (Abbildung 1A-B). Befestigen Sie die Luftpumpe (zur Durchführung einer Dickdarminsufflation) mit dem mitgelieferten Schlauch an das Gasventil auf der linken Seite des Mantels neben dem Arbeitskanal (Abbildung 1C).
   Anmerkung: Obwohl die hier beschriebene Linse 0° ist, kann hierfür auch eine 30° Linse verwendet werden.
2. Vergewissern Sie sich, dass sich der Arbeitskanal in der geöffneten Position befindet, und führen Sie eine Biopsiezange 3 Fr durch den Arbeitskanal ein und schieben Sie sie bis zum Ende der Schleuse vor (wobei Sie darauf achten, dass sie nicht aus der Schleuse herausragt) (Abbildung 1C). Befestigen Sie das zusammengebaute Endoskop gemäß den Anweisungen des Herstellers an der Lichtquelle und dem Videobildgerät.
3. Betäuben Sie die Maus mit 5% Isofluran mit Sauerstoff in einer Induktionskammer. Bewegen Sie dann die Maus auf eine endoskopische Staging-Plattform, die auf der ventralen Seite ein Heizsystem (zur Vermeidung von Unterkühlung) enthält, und halten Sie sie unter Narkose mit einem Nasenkonus mit 2 % Isofluran und Sauerstoff. Tragen Sie Tierarztsalbe auf die Augen auf, um Trockenheit während der Narkose zu verhindern. Stellen Sie sicher, dass die Maus vollständig betäubt ist, indem Sie den hinteren Fuß vorsichtig zusammendrücken, um auf einen Reflex zu testen.
   Anmerkung: Jeder Stamm oder jedes Geschlecht von Mäusen kann mit dieser Technik verwendet werden; Es ist jedoch vorzuziehen, dass die Mäuse mindestens 8 Wochen alt sind, damit sie groß genug für den Eingriff sind.
   1. Tragen Sie Tierarztsalbe auf die Augen auf, um Trockenheit während der Narkose zu verhindern.
   2. Stellen Sie sicher, dass die Maus vollständig betäubt ist, indem Sie den hinteren Fuß vorsichtig einklemmen, um auf einen Reflex zu testen.
4. Füllen Sie eine 3-ml-Spritze mit einer beigefügten Rattensondennadel mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) bei Raumtemperatur. Führen Sie die Nadel etwa 1 cm in den Anus der Maus ein und infundieren Sie PBS vorsichtig, um das Stuhlmaterial zu entfernen. Mehrere Kotpellets sollten zusammen mit dem PBS, das infundiert wurde, aus der Maus austreten.
   Anmerkung: Das Einträufeln eines übermäßigen PBS-Volumens kann zu einer Schaumbildung im Lumen führen, die die Sicht auf das Lumen beeinträchtigen könnte.
5. Führen Sie das zusammengebaute Endoskop 0,5 cm in den Anus der Maus ein. Schieben Sie die Biopsiezange in das Lumen des Rektums vor, bis die vollen "Kiefer" (einschließlich Scharnier) der Pinzette hinter dem Ende der Hülle liegen (wie auf dem Videomonitor zu sehen). Drehen Sie die Pinzette um 90°, so dass sich die Backen in Ost-West-Ausrichtung öffnen.
6. Öffnen Sie zur Biopsie die Pinzette und schieben Sie sie ca. 1 cm vor, schließen Sie die Pinzette und ziehen Sie sie in einer sanften Bewegung schnell wieder zurück, während Sie sie geschlossen lassen.
   1. Vermeiden Sie eine vollständige Insurblation des Dickdarms, wenn Sie die Biopsie durchführen. Lassen Sie daher während dieses Schritts die rechte Seite des Gasventils offen. Es ist jedoch zu beachten, dass beim Öffnen der Pinzette die Gefahr besteht, dass die Schleimhaut beschädigt wird, wenn sich der Dickdarm in dieser Position befindet.

Abbildung 1: Gegenstände, die für die Durchführung von Biopsien benötigt werden. (A) Bild der Linse (a), der Scheide (b) und der Biopsiezange (c). (B) Einsetzen der Linse in die Hülle. (C) Einführung der Pinzette durch den Arbeitskanal der Schleuse (durchgezogener Pfeil). Der gestrichelte Pfeil zeigt die korrekte Position für die Befestigung der Luftpumpe an.