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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Entnahme des Wundbettes für die molekulare Analyse
- Euthanasieren Sie die Maus mit CO2 -Erstickung, gefolgt von einer Gebärmutterhalsluxation (oder einer gleichwertigen Technik) am ausgewählten Tag nach der Biopsie.
- Entnehmen Sie den distalen Bereich des Dickdarms, indem Sie die Haut und den Bauchmuskel öffnen, um die Körperhöhle freizulegen. Legen Sie eine geschlossene Schere unter den Dickdarm und heben Sie ihn vorsichtig an, um ihn aus dem darunter liegenden Mesenterium zu lösen, und schneiden Sie dann den Dickdarm in seiner Mitte und am Anus, um ihn von der Maus zu entfernen.
- Spülen Sie den Stuhlinhalt mit einer Rattensondennadel, die an einer 20-ml-Spritze befestigt ist, die mit eiskaltem 1x PBS gefüllt ist, und legen Sie dann den Dickdarm auf Filterpapier.
- Schneiden Sie den Doppelpunkt auf dem Filterpapier in Längsrichtung auf und achten Sie darauf, dass die mesenteriale Seite mit der Vorderseite nach unten gegen das Filterpapier zeigt. Tragen Sie 0,2 % Methylenblau mit einer Quetschpipette auf die Schleimhaut auf, während sich das Gewebe noch auf dem Filterpapier befindet, und lassen Sie dann überschüssiges Methylenblau abtropfen. Betrachten Sie den Dickdarm unter einem Präpariermikroskop und lokalisieren Sie das Wundbett (Abbildung 1A).
- Schneiden Sie mit einer 4-Zoll-Mikro-Irisschere um den Rand des Wundbetts herum (Abbildung 1A, gestrichelter Kreis), achten Sie darauf, nicht in die Muskelschicht einzuschneiden (es sei denn, der Muskel ist erwünscht) und übertragen Sie das präparierte Wundbett mit einer Pinzette mit feiner Spitze in ein Röhrchen, um es einzufrieren oder die gewünschte Aufbewahrungsmethode zu verwenden.
Anmerkung: Die Menge an Gewebe, die auf diese Weise entnommen wird, reicht aus, um RNA für die RNA-Seq oder eine gleichwertige Analyse zu extrahieren.
