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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Erzeugung der proximalen Dickdarmschleife (pcLoop)
- Hautvorbereitung: Peeling des Fells der Bauchmittellinie mit Alkoholtupfern oder Mullschwamm, der mit 70% Ethanol getränkt ist. Befeuchten Sie eine große Fläche des Fells nicht mit Alkohol, um eine Unterkühlung zu vermeiden.
- Führen Sie mit einer Schere eine Mittellinien-Laparotomie durch. Machen Sie einen vertikalen Schnitt in der Mitte des Bauches (ca. 2 cm lang) und legen Sie das Bauchfell frei. Achten Sie darauf, die intraabdominalen Organe nicht zu verletzen.
- Legen Sie vorgeschnittene nasse Baumwollgaze über die freiliegende intraabdominale Höhle.
- Verwende feuchte Wattestäbchen, um den Blinddarm zu mobilisieren und nach außen zu verkörpern. Lege den Blinddarm vorsichtig auf die feuchte Baumwollgaze.
Anmerkung: Caecum ist bei der Mehrzahl der Mäuse unabhängig vom Geschlecht des Tieres im linken kaudalen Quadranten der Bauchhöhle lokalisiert.
- Mit feuchten Wattestäbchen das gesamte Ileum nach außen streichen und auf eine nasse Wattegaze legen. Identifizieren Sie den proximalen Dickdarm und die Blutversorgung im Mesokolon. Mobilisieren Sie das proximale Dickdarm und legen Sie mit einer Zange mit feiner Spitze die erste Ligatur in einem gefäßfreien Bereich im Mesokolon in etwa 0,5 cm Abstand vom Blinddarm an (Abbildung 1B).
- Messen Sie 2 cm ab der ersten Ligatur und legen Sie eine zweite Ligatur an einer Stelle an, die frei von Blut im Mesokolon ist (Abbildung 1C).
- Schneiden Sie mit einer feinen Schere vorsichtig neben jede Ligatur, um einen 2 cm langen pcLoop.
Anmerkung: Schneiden Sie mit einer feinen Schere vorsichtig neben jeder Ligatur, um die 4 cm lange Ileumschlinge zu isolieren, wobei die Blutversorgung und die Mesenterialmembran intakt bleiben. Es ist wichtig, beide Enden abzuschneiden, um einen pcLoop zu isolieren, der sanft von luminalem Inhalt gereinigt wird. Schneiden Sie vorsichtig durch das Dickdarmgewebe und das Mesokolon, um zu verhindern, dass kleine Gefäße in das Darmlumen einbluten. Verwenden Sie bei Bedarf einen thermischen Kauter, um die Blutung an der Inzisionsstelle zu begrenzen.
- Spülen Sie den pcLoop vorsichtig mit warmem HBSS, um den Kot mit einer flexiblen gelben Ernährungssonde zu entfernen, die an einer 10-ml-Spritze befestigt ist (Bereiten Sie eine mit warmem HBSS gefüllte 10-ml-Spritze vor und befestigen Sie sie an einer gelben Ernährungssonde. Diese Spritze wird zur Befeuchtung von freiliegendem Gewebe während der Operation verwendet).
- Lilizieren Sie die beiden abgeschnittenen Enden des gespülten pcLoop mit Seidennaht.
- Verwenden Sie eine 1-ml-Spritze mit einer 30-g-Nadel, um langsam 200 μl Reagenz wie FITC-Dextrare (1 mg / ml in HBSS) zu injizieren. Bewahren Sie die unbenutzte FITC-Dextran-Lösung lichtgeschützt auf, um die Standardkurve nach der Serumentnahme vorzubereiten. Der pcLoop bläst sich auf, was zu einer mäßigen Dehnung der Schleimhaut führt (Abbildung 1D).
Anmerkung: Injizieren Sie das Reagenz in das pcLoop-Lumen auf der gegenüberliegenden Seite der Arteria mesenterialis. Stellen Sie die Konsistenz zwischen den Tieren sicher und erstellen Sie einen 2 cm langen pcLoop, um eine gleichmäßige Ausdehnung der Schleimhaut zu gewährleisten.
- Verwenden Sie feuchte Wattestäbchen, um den ligierten pcLoop, das Ileum und den Blinddarm vorsichtig wieder in die Bauchhöhle zu legen.
- Verwenden Sie einen Nadelhalter, eine anatomische Pinzette und 3.0 nicht resorbierbare Seidennähte mit umgekehrter Schnittnadel, um die Bauchdecke zu schließen.
- Legen Sie das Tier für die Inkubationszeit in eine temperaturgeregelte Anästhesiekammer.
