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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Zubereitung von Tieren
- Sedatieren Sie ein Schwein durch intramuskuläre (i.m.) Injektion von Tiletamin (3,75 mg/kg) und Zolazepam (3,75 mg/kg) und Dexmedetomidin (37,5 μg/kg). Warte, bis es bewusstlos wird.
- Bereiten Sie einen intravenösen Zugang vor, indem Sie eine 20-G-Kanüle in die Ohrvene einführen.
Anmerkung: Stellen Sie sicher, dass sich die Kanüle in der Vene befindet, indem Sie 5-10 ml Kochsalzlösung durch die Kanüle injizieren. Wurde die Vene übersehen, macht sich dies durch kleine Ödeme im Ohrgewebe bemerkbar.
- Intubieren Sie das Schwein, um sicherzustellen, dass die Atemfrequenz während der gesamten Operation reguliert werden kann.
Anmerkung: Stellen Sie eine erfolgreiche Intubation sicher, indem Sie Druck auf den Thorax des Schweins ausüben und bestätigen, dass gewaltsam ausgeatmete Luft aus dem Intubationsschlauch austritt.
- Befestigen Sie den Intubationsschlauch an einem Beatmungsgerät, das auf eine Atemfrequenz von 14 Atemzügen/min eingestellt ist.
- Schließen Sie ein Pulsoximeter und eine Manschette an den Schwanz an, um die Herzfrequenz (HF), den Blutdruck (BP) und die Sauerstoffsättigung (sats) zu überwachen. Setzen Sie ein Rektalthermometer ein, um die Kerntemperatur zu überwachen.
- Bereiten Sie einen IV-Beutel mit Ketamin (5 mg/kg/min), Midazolam (0,25 mg/kg/min) und Fentanyl (2,5 μg/kg/min) in Kochsalzlösung vor und beginnen Sie mit der Infusion durch die Ohrvene in einer Menge von ca. 2 Tropfen/s.
Anmerkung: Während der Operation muss die Infusionsrate je nach Vitalwert des Tieres möglicherweise erhöht oder verringert werden.
- Wenn sich das Schwein in Bauchlage befindet, tasten Sie den Hinterkopf und den Hals des Tieres ab, um den Hinterhauptkamm und die Wirbelsäule der ersten Brustwirbel sowie die Basis jedes Ohrs zu lokalisieren und zu markieren.
- Zeichne eine gerade Linie zwischen dem Kamm und den Wirbeln entlang der Längsachse. Zeichnen Sie zwei Linien vom Kamm bis zur Basis jedes Ohrs, indem Sie der Schädelbasis folgen (Abbildung 1A).
- Überprüfen Sie, ob sich das Tier in einem tiefen Schlaf befindet, indem Sie den Schwanz vorsichtig einklemmen und darauf achten, dass kein Schwanzreflex vorhanden ist.
Anmerkung: Wenn das Tier immer noch reflexiv ist, sollte die anästhetische Infusionsrate schrittweise erhöht werden, bis das Tier keinen Reflex mehr zeigt.
2. Chirurgie
HINWEIS: Während der gesamten Operation ist es notwendig, mindestens einen Assistenten zu haben, der die leichten Blutungen absaugt und alle durchtrennten Gefäße kauterisiert.
- Machen Sie mit einem Skalpell mit einer Klinge # 21 einen Hautschnitt entlang der Längslinie bis zum Muskel.
- Verlängern Sie zwei senkrechte Hautschnitte mit einer Länge von 10-15 cm weiter entlang der Schultern.
- Machen Sie von den Hinterhauptkämmen aus Hautschnitte entlang der Linie bis zur Basis jedes Ohrs.
- Fassen Sie die am Hinterhauptkamm gebildeten Hautwinkel mit einer anatomischen Pinzette und trennen Sie die Haut vorsichtig vom darunter liegenden Muskel, indem Sie mit der Skalpellklinge leicht über die Faszie fahren und sich von der rostralen zur kaudalen Haut bewegen. Nach der Resektion der Haut nach jedem der fünf Schnitte sollten dann Teile der Trapezmuskeln sichtbar sein.
- Machen Sie mit dem Skalpell einen Längsschnitt, ca. 1 cm tief, wo der Trapezius an der Mittellinie zusammentrifft.
Anmerkung: Beim Durchtrennen der Muskulatur kommt es zu einer erhöhten Blutungsneigung, daher sollte der Kauterizer griffbereit sein. Wenn ein größeres Gefäß durchtrennt wird, sollte eine Person es schnell mit der Gaze komprimieren, während die andere Person den Kauterizer verwendet.
- Führen Sie mit einer Kombination aus gerader und gebogener chirurgischer Zange eine stumpfe Dissektion entlang des Längsschnitts in den Muskeln durch. Dadurch werden die Bäuche des Trapezius sowie der darunter liegende Musculus semispinalis capitus biventer getrennt.
- Durchtrennen Sie alle verbleibenden Muskelfasern mit einem Skalpell und fahren Sie mit der stumpfen Dissektion fort, bis der Semispinalis capitus complexus sichtbar wird.
- Durchtrennen Sie die Ursprünge des Musculus trapezius und des Musculus capitus biventer entlang der hinteren Seite des Schädels. Trennen Sie sie vorsichtig mit dem Skalpell in Längsrichtung und führen Sie eine stumpfe Dissektion durch, bis der Semispinalis capitus complexus vollständig sichtbar ist.
- Ziehen Sie den Trapezius und den Musculus capitus biventer mit selbsthaltenden Retraktoren zurück.
- An der Stelle, an der die Bäuche des Semispinalis capitus complexus in der Mittellinie zusammenkommen, ist mit dem Skalpell ein Längsschnitt von ca. 1 cm Tiefe vorzunehmen.
Anmerkung: Achten Sie hier auf zusätzliche Blutungen. Blutungen können mit einer Kombination aus Wattestäbchen und Kauterisation behandelt werden.
- Führen Sie mit einer chirurgischen Zange eine stumpfe Dissektion entlang des Längsschnitts zwischen den Muskelbäuchen durch, bis die dorsale Seite des Atlas (CI) tastbar ist.
- Durchtrennen Sie die Ursprünge der Muskeln semispinalis capitus complexus entlang der hinteren Seite des Schädels und trennen Sie sie in Längsrichtung von den darunter liegenden Wirbeln durch Skalpell und stumpfe Dissektion.
- Ziehen Sie die Muskeln des Semispinalis capitus complexus mit einem weiteren Satz selbsthaltender Retraktoren zurück.
- Entfernen Sie mit einem Skalpell vorsichtig das restliche Gewebe, das über dem Bereich liegt, an dem der Atlas auf die Schädelbasis trifft.
- Legen Sie einen Arm unter den Hals des Tieres und einen Finger an die Verbindungsstelle zwischen Atlas und Schädel, heben Sie gleichzeitig den Kopf an und beugen Sie den Hals, während Sie mit dem Finger tasten, um die Cisterna magna mit der anderen Hand zu enthüllen.
Anmerkung: Die Cisterna magna ist beim Abtasten als starke elastische Struktur mit geringem Rückprall erkennbar, wenn der Druck mit dem Finger abgelassen wird.
