Tracer-Molekül-Verabreichung in der Cisterna magna: Eine Methode zur Verabreichung fluoreszierender Tracer-Moleküle durch direkte Kanülierung der Cisterna magna beim Schwein

Zusammenfassung

Quelle: Bèchet, N. B., et al. Direkte Kanülenimplantation in der Cisterna Magna von Schweinen. J. Vis. Exp. (2021).

Dieses Video beschreibt das Protokoll für die Verabreichung von Tracermolekülen durch direkte Kanülierung der Cisterna magna in einem Schweinegehirn. Diese Methode hilft, die Verteilung der Zerebrospinalflüssigkeit im glymphatischen System sichtbar zu machen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Kanülierung und Injektion

HINWEIS: Dieser Schritt erfordert mindestens zwei Personen und wird mit dem Kopf des Tieres angehoben und dem Hals gebeugt.

1. Beginnen Sie mit einem betäubten Schwein, das mit einer chirurgisch zugänglichen Cisterna magna voroperiert wird.
2. Achten Sie darauf, dass eine Person den Kopf und den Hals des Tieres anhebt und beugt, während die andere Person nach der Cisterna magna tastet und sich ihre anatomische Lage notiert.
3. Führen Sie langsam und vorsichtig eine 22-G-Kanüle in einem schrägen Winkel zur Längsachse durch die Dura in die Cisterna magna ein.
   Anmerkung: Führen Sie die Kanüle nicht zu tief ein, da dies zu einer Schädigung des Gehirns führen kann. Zu wissen, wie weit die Kanüle eingeführt werden muss, kommt mit der Erfahrung darin, zu verstehen, wie es sich anfühlt, wenn die Kanüle die Dura durchsticht. Im Wesentlichen ist die Kanüle, genau wie die Dura durchstochen wurde, tief genug für eine erfolgreiche Tracer-Injektion. Diese Tiefe beträgt ca. 3-5 mm, variiert jedoch je nach Größe oder Alter des Tieres. Eine erfolgreiche Kanülierung sollte sofort durch die Visualisierung eines klaren, pulsierenden Liquors erkennbar sein, der die Kanüle aufsteigt. Für das beste Ergebnis wird empfohlen, vorher mehrere Kanülen an euthanasierten Tieren zu üben, um ein Verständnis für das Duralpiercing zu bekommen.
4. Ziehen Sie die Nadel aus der Kanüle zurück und setzen Sie eine Kappe auf das Schloss.
5. Tragen Sie zuerst Sekundenkleber und einen Beschleuniger an der Stelle auf, an der die Kanüle in das Gewebe eintritt, gefolgt von dem Auftragen des Zahnzements. Warten Sie 5 Minuten, bis der Zement ausgehärtet ist.
6. Entfernen Sie vorsichtig die Kappe von der Kanüle und befestigen Sie das männliche Ende des IV-Leitungshahns mit 10 cm Verlängerung mit dem Tracer an der Kanüle.
7. Injizieren Sie den Tracer langsam von Hand oder mit einer Mikroinfusionspumpe mit einer Geschwindigkeit von 100 μL/min. Entfernen Sie den 3-Wege-IV-Leitungshahn mit einer Verlängerung von 10 cm und setzen Sie ihn wieder durch die Kappe ein. Der Tracer sollte nun sichtbar sein, der an der Basis der Kanüle pulsiert.
   Anmerkung: Wenn Sie von Hand injizieren, tun Sie dies, bis der Tracer gerade noch im Kanülenschaft sichtbar ist, etwa 1-2 mm über der Stelle, an der der Zahnzement den Schaft bedeckt.
8. Legen Sie nach der Injektion Sandsäcke unter den Hals, um eine gewisse Beugung zu erhalten. Der Kopf kann dann losgelassen werden, und das Tier wird in einer ruhigen Bauchlage belassen.
9. Lösen Sie die selbsthaltenden Retraktoren und platzieren Sie die Muskeln so, wie sie zuvor lagen. Bringen Sie die Haut mit chirurgischen Handtuchklemmen über den Muskeln zusammen.
10. Decken Sie Handtuchklammern und Schnitte mit Gaze und dann mit einer Decke ab, um den Wärmeverlust zu begrenzen.
11. Lassen Sie den Tracer für die gewünschte Zeit zirkulieren, bevor Sie das Tier durch i.v. Pentobarbital-Injektion (140 mg/kg) einschläfern. Bestätigen Sie die Sterbehilfe durch das Fehlen von Herztönen bei der Auskultation mit einem Stethoskop.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
18G Nadel	Mediq
1ml Spritze	FischerSci	15849152
20G Kanüle	Mediq	Na
22G-Kanüle	Mediq	Na
Rinderserumalbumin Alexa-Fluor 647 Konjugat	ThermoFischer	Nr. A34785	2 Fläschchen (10 mg)
CaCl2	Sigmaaldrich	Nr. C1016
Zahnzement	Agnthos	7508
Traubenzucker	Sigmaaldrich	Nr. G8270
Insta-Set CA Accelerator	BSI-Inc	BSI-151
IV-Leitungsarmatur, 3-POLIG mit 10cm Verlängerung	Bbraun	Na
Kcl	Sigmaaldrich	Nr. 9333
Textmarker	Na	Na
MgCl2	Sigmaaldrich	M8266
MilliQ Wasser	Na	Na
NaCL	Sigmaaldrich	Nr. S7653
NaH2PO4	Sigmaaldrich	Nr. S8282
NaHCO3	Sigmaaldrich	Nr. S5761
salzhaltig	Mediq	Na
Selbsthaltende Retraktoren	Na	Na
Sekundenkleber	Na	Na
Chirurgische gebogene Schere	Na	Na
Chirurgische Handtuchklemmen	Na	Na