Extraktion von bronchiolärem Gewebe von Schweinen: Ein Verfahren zur Präparierung von bronchiolären Gewebeschnitten aus der Lunge von Schweinen

Zusammenfassung

Quelle: Harrington, N. E. et al. Antibiotika-Wirksamkeitsprüfung in einem Ex-vivo-Modell von Pseudomonas aeruginosa- und Staphylococcus aureus-Biofilmen in der Mukoviszidose-Lunge. J. Vis. Exp. (2021)

In diesem Video beschreiben wir ein chirurgisches Verfahren zur Extraktion von bronchiolärem Gewebe aus entnommener Schweinelunge. Das ex vivo bronchioläre Gewebe könnte zur Entwicklung von Infektionsmodellen für die Untersuchung chronischer Lungeninfektionen verwendet werden.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Dissektion von ex vivo Schweinelungengewebe (EVPL)

1. Die Lungen so bald wie möglich nach der Schlachtung von der angegebenen Quelle beziehen und sicherstellen, dass sie kalt bleiben, indem sie in einer Haushaltskühlbox zum Labor transportiert werden.
   Anmerkung: Lungen, die näher am Schlachttag liegen, weisen weniger Blutergüsse durch die Lagerung auf, aber Gewebe, das bis zu 4 Tage nach der Schlachtung kühl gelagert wird, kann ebenfalls verwendet werden. Da die Kühlbox in die Metzgerei oder den Schlachthof gebracht werden muss, muss sie nach jedem Gebrauch gemäß den örtlichen Laborrichtlinien dekontaminiert und bei Nichtgebrauch außerhalb des mikrobiologischen Labors gelagert werden, um das Risiko einer Kontamination und eines Durchbruchs des Containments zu verringern.
2. Legen Sie die Lunge auf einer sterilisierten Oberfläche und unter einer Flamme auf ein sauberes Plastikschneidebrett, das mit autoklavierter Aluminiumfolie bedeckt ist. Vergewissern Sie sich, dass die Bronchiolen intakt bleiben. Wenn es im Schlachthof oder während des Transports zu Schäden gekommen ist, ist die Lunge nicht für den Einsatz geeignet.
3. Erhitzen Sie ein Spachtel unter einer Flamme und berühren Sie das Messer ganz kurz mit dem Bereich der Lunge, der die Bronchiolen umgibt, um die Oberfläche des Gewebes zu sterilisieren.
4. Schneiden Sie das Oberflächengewebe, das die Bronchiolen umgibt, mit einer sterilen Rasierklinge ab. Machen Sie Schnitte parallel zu den Bronchiolen, um Schäden zu vermeiden.
5. Sobald die Bronchiolen freigelegt wurden, machen Sie einen Querschnittsschnitt durch die Bronchiole an der höchsten sichtbaren Stelle, um die Bronchiolen zu befreien.
6. Halten Sie das freie Ende der Bronchiole mit einer sterilen Pinzette leicht fest und schneiden Sie mit einer sterilen Rasierklinge das restliche unerwünschte Gewebe ab. Machen Sie einen letzten Querschnittsschnitt über die Bronchiolen, bevor eine Verzweigung sichtbar ist, um die Bronchiole aus der Lunge zu entfernen.
7. Legen Sie die Bronchiolen in die erste Wäsche mit DMEM/RPMI 1640. Lassen Sie die Bronchiolen in der Wäsche und wiederholen Sie die Schritte 1.2-1,5, um weitere Bronchiolenschnitte aus derselben Lunge zu entnehmen, die erforderlich sind, um genügend Gewebeschnitte zu erhalten.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
70% Ethanol oder ähnliches für Oberflächensterilisations- und Flamin-GOF-Dissektionsgeräte
Aluminiumfolie - durch Autoklavieren vorsterilisiert - zum Abdecken des Schneidebretts, auf dem Sie die Lungen sezieren werden
Bunsenbrenner
Schneidebrett - wir empfehlen ein Kunststoffbrett, um eine einfache Dekontamination mit Alkohol zu ermöglichen.
Kühlbox für den Transport der Lunge ins Labor
Präparierschere in verschiedenen Größen
Dulbeccos modifiziertes Eagle medium (DMEM)
Fisherbrand 2 mL verstärkte Tuben	Thermo Fischer	15545809
Großes Palettenmesser
Montierte Rasierklingen
Schneidebrett aus Kunststoff und Aluminiumfolie zur Schaffung einer sterilen und reinigbaren Sezieroberfläche
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 mittel
Auswahl der Pinzetten (stumpfe Spitzen empfohlen)
Geeignete Behälter für die Entsorgung von kontaminierten scharfen Gegenständen und Schweinegewebe gemäß den Gesundheits- und Sicherheitsrichtlinien Ihrer Einrichtung.