Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Vorbereitung von Tieren
HINWEIS: Die Teile des orbitalen Tränendrüsensystems werden injiziert.
- Die Kaninchen werden mit Acepromazin 0,2 mg/kg subkutan sediert.
- Scheren Sie das Fell im periorbitalen und Kopfhautbereich ab und entfernen Sie alle Fellreste vollständig mit Nair. Lassen Sie die Haut vollständig glatt, um die anatomischen Merkmale und die US-gesteuerte Injektion von Concanavalin A besser sichtbar zu machen (Abbildung 1).
- Induzieren Sie eine mäßige Sedierung, wie oben beschrieben.
2. Injektion der orbitalen oberen Tränendrüse (OSLG)
HINWEIS: OSLG folgt in rascher Folge.
- Üben Sie medialen Druck auf den Globus aus, wodurch das OSLG aus dem hinteren Einschnitt herausragt. Üben Sie medialen Druck auf den Globus aus (Abbildung 2, roter Pfeil) mit der Protuberanz des OSLG aus dem hinteren Einschnitt aus. Die Protuberanz dient als grobe Lokalisation, um den hinteren Einschnitt zu finden.
- Verwenden Sie eine gebogene Pinzette mit geschlossenen Spitzen, um den Bereich einzudrücken, bis die knöcherne Öffnung im Schädel zu spüren ist. Diese wird schlitzartig mit einer anterioren/posterioren Richtung unter der Protuberanz sein.
- Üben Sie mit einer Pinzette leichten Druck aus, um eine Vertiefung in der Haut zu hinterlassen, die als Orientierungspunkt für die Platzierung der Nadel dient (Abbildung 3A).
- Führen Sie eine Nadel (Tuberkulinspritze mit einer 27-Gauge-Nadel mit einem Durchmesser von 5/8 Zoll) senkrecht zur Haut über der Eindruckmarke (Abbildung 3B) ~ 1/4 Zoll in den Einschnitt ein, dann lenken Sie die Nadel nach hinten und außen in Richtung des lateralen Canthus und zielen Sie auf den Mittelpunkt zwischen der Injektionsstelle und dem knöchernen Orbitalrand.
Anmerkung: Wird der Schnitt mit der Nadel nicht genau anvisiert, blockiert der Schädel sein Vorschieben.
- Sobald die Nabe der Nadel erreicht ist, injizieren Sie langsam 1000 μg Con A in einem Volumen von 0,2 mL (Abbildung 3C).
- Schließen Sie die Injektion sowohl des PSLG als auch des OSLG innerhalb von 2-3 Minuten
ab
- Entfernen Sie das Tier aus der Isofluran-Sedierung (falls noch nicht abgeschlossen). Die Injektion der unteren Tränendrüse (ILG) kann in der Regel ohne weitere Sedierung durchgeführt werden.
