Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Modellvorbereitung
- Halten Sie das 50 kg schwere erwachsene männliche Schwein 1 Woche vor der Operation in einer Tierpflegeeinrichtung unter, um das Tier an die Haltungsbedingungen und die Betreuer zu gewöhnen. Fasten Sie das Modell mindestens 6 Stunden lang, bevor Sie mit der Anästhesie beginnen.
- Anästhesieren Sie das Modell mit einer intramuskulären Injektion von Ketamin (33 mg/kg), Atropin (0,04 mg/kg) und Buprenorphin (0,05 mg/kg) sowie inhalativem Isofluran (5%)9.
- Bringen Sie das Modell in Rückenlage und besprühen Sie die Stimmbänder mit Lidocain (1%), um Laryngospasmus zu verhindern. Führen Sie eine direkte endotracheale Intubation mit einem 6,5 Fr Endotrachealtubus mit Manschette durch. Bestätigen Sie die korrekte Position des Endotrachealtubus mittels Kapnographie.
- Führen Sie eine 18G IV in die marginale Ohrvene ein und beginnen Sie mit einer Infusion von Ringer-Laktat mit einer Rate von 200 ml/h. Tragen Sie eine milde Salbe auf die Augen des Modells auf, um Trockenheit unter Vollnarkose zu verhindern.
- Überwachen Sie die Herzfrequenz und die Sauerstoffsättigung des Modells mit einem Pulsoximeter, das am Heck des Modells angebracht ist. Beatmung des Modells zwischen 14 - 16 Atemzügen/min mit einem mechanischen Beatmungsgerät und einem Atemzugvolumen von 5 - 10 mL/kg. Halten Sie eine angemessene Anästhesie aufrecht, indem Sie eine minimale Alveolarkonzentration (MAC) von Isofluran zwischen 2 und 2,5 anstreben.
- Bestätigen Sie vor Beginn der Operation die angemessene Anästhesietiefe, indem Sie die Schmerzreflexe mit einem Kneifen in die Zehen des Hinterbeins testen. Bewerten Sie die Schmerzreflexe während der Operation in regelmäßigen Abständen neu.
2. Vorbereitung des Geräts
- Bereiten Sie die gezündete Kochsalzlösung/bipolare Radiofrequenz (SBRF; Abbildung 1) Gerät gemäß den Herstellerangaben.
- Öffnen Sie das Handstück (6.0 bipolare Dichtspitze) und schließen Sie es an den Generator an.
- Stellen Sie die Einstellung für die Salzflussrate auf Niedrig ein. Verwenden Sie 0,9% Kochsalzlösung für eine maximale Energieleitung.
- Stellen Sie die Radiofrequenz-Leistungseinstellung auf 160 W ein.
3. Chirurgie: Laparotomie
- Führen Sie einen langen, offenen Laparotomieschnitt in der Mittellinie mit einem Skalpell #10 durch, das sich vom Xiphisternum bis zum Schambein erstreckt und durch alle Schichten der Bauchdecke verläuft.
- Stellen Sie eine angemessene Freilegung der soliden Organe von Interesse (z. B. Leber, Milz, Niere) her, mobilisieren Sie andere Strukturen und setzen Sie bei Bedarf einen Retraktor ein.
Anmerkung: Der Einfachheit halber wird die Leber für den Rest dieses Protokolls als das solide Organ von Interesse bezeichnet. Dieses Protokoll umfasst auch die Entstehung von Verletzungen ähnlichen Grades an Niere und Milz.
4. Chirurgie: Simulierte Verletzung solider Organe
HINWEIS: Die unten beschriebenen Verletzungen stellen eine sich verschlechternde Hierarchie von Verletzungen dar. Die Verletzungen werden von einem erfahrenen Unfallchirurgen verursacht und die Blutstillung wird von einem anderen Chirurgen durchgeführt.
- Üben Sie mit einer Skalpellklinge #10 eine abrasive Kraft (hin und her) auf die Leberkapsel aus, um eine Kapselblutung auszulösen. Die Verletzung sollte oberflächlich (d.h. 1 - 2 mm) und2 cm 2 groß sein. Die Größe der Verletzung kann dann nach Ermessen des Bedieners in Schritten von 1 cm2 erhöht werden.
- Erzeugen Sie feste Organrisse von zunehmender Schwere mit der direkten Anwendung eines Skalpells. Die Länge der Platzwunde kann sich von 5 cm bis zur gesamten Länge des Organs erstrecken. Die Tiefe der Schnittwunde sollte 1 cm betragen und dann nach Ermessen des Bedieners in Schritten von 1 cm erhöht werden.
- Erzeugen Sie durchdringende Verletzungen mit einem stumpfen Gerät wie einer Kelly-Klemme mit einer Stichbewegung. Diese können eine partielle Dicke (d.h. 50% des Organs) oder eine volle Dicke (d.h. vollständig durch das Organ hindurchgehend) haben.
5. Blutstillung
- Drücken Sie den Knopf des Handstücks, um den gleichzeitigen Fluss von Kochsalzlösung und die Abgabe von bipolarer Radiofrequenzenergie zu initiieren. Die Kochsalzlösung kocht an der Applikationsstelle.
- Tragen Sie die Spitze des Geräts direkt auf die raue Oberfläche der Leber, auf oberflächliche Blutungsbereiche oder in Defekten in der Leber selbst auf. Stechen Sie nicht mit dem Endeffektor in das Organ.
- Wenden Sie bei Bedarf eine gleichzeitige Absaugung aus einem Standard-chirurgischen Saugnapf an, um die erhitzte Kochsalzlösung und Energie direkt an die Bereiche der anhaltenden Blutung abzugeben. Dies hilft auch, den genauen Ort der anhaltenden Blutung zu visualisieren.
- Erhitzen Sie das Gewebe auf ca. 100 °C (thermische Koagulation ohne nennenswerte Verkohlung) durch eine sanfte Hin- und Herbewegung. Nach 3 - 5 s tritt ein auditives "Plopp" auf, das bedeutet, dass die Verbrennung abgeschlossen ist. Der Benutzer kann das Gerät dann auf organisierte Weise zum nächsten Zielort bewegen.
- Gegebenenfalls ist in Verbindung mit der Anwendung der SBRF und der Absauggeräte ein präzise gerichteter Hochspannungs-Elektrokauter anzuwenden, um eine Blutstillung zu erhalten. Dies kann bei der größten und stärksten Blutung erforderlich sein.
6. Abdichten von kleinen bis mittleren Gallengängen
- Mit der gleichen Methode wie oben beschrieben, legen Sie die Instrumentenspitze über den Schnitt-/Verletzungsrand des Leberparenchyms, um kleine bis mittlere Gallengänge zu verschließen.
