Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Implantation von Lebertumoren durch Laparotomie
- Bereiten Sie das Empfängerkaninchen auf die Laparotomie vor. Anästhesieren Sie das Empfängerkaninchen mit 45 mg/kg Ketamin und 5 mg/kg Xylazin zur Induktion, gefolgt von einer Intubation und Erhaltungstherapie mit 1 % bis 3 % Isofluran nach Bedarf. Wenn das Kaninchen betäubt ist, rasieren Sie die Operationsstelle mit einer Haarschneidemaschine. Reinigen Sie den Inzisionsbereich mit dreifacher Wäsche mit Betadin-Peeling, 70%iger Ethanollösung und Betadinlösung und drapieren Sie den Bauch steril chirurgisch.
- Mit einer #15-Klinge leiten Sie die Laparotomie ein, indem Sie einen kleinen vertikalen Schnitt durch die Haut des Kaninchens machen, beginnend mit dem Xiphoid-Prozess. Dies sollte leicht zu ertasten sein und ist in der Regel etwa so groß wie ein amerikanischer Penny. Siehe Abbildung 1.
- Reflektieren Sie die Haut und identifizieren Sie die Linea alba. Dabei sollte es sich um ein reflektierendes weißes Gewebeband handeln, das sich in der Mittellinie nach unten bewegt. Verwenden Sie eine stumpfe Dissektion, um die Linea alba zu durchqueren und das Peritoneum freizulegen. Siehe Abbildung 2.
Anmerkung: Das Peritoneum ist leicht zu erkennen, da es direkt über dem Darm liegt, der sich mit der Atmung bewegt.
Vorsicht: Das Bauchfell neigt aufgrund der Oberflächenspannung dazu, am darunter liegenden Darm zu haften. Die Verwendung eines stumpfen Traumas zur Präparation der Linea alba hilft, das Risiko einer Perforation des darunter liegenden Darms zu verringern.
- Sobald das Bauchfell freigelegt ist, präparieren Sie es vorsichtig, um in die Bauchhöhle zu gelangen. Die Leber kann nun identifiziert werden. Um sich im Bauchraum besser zurechtzufinden, verlängern Sie den Mittellinienschnitt 1 bis 20122 cm nach unten durch die Haut, den Muskel und das Bauchfell.
Anmerkung: Die Verlängerung des Mittellinienschnitts kann einfach und sicher durchgeführt werden, indem ein gekrümmtes Blutstillungsmittel vorsichtig in den Peritonealraum eingeführt wird, wobei die gebogene Spitze oberflächlich zum Peritoneum zeigt. Öffnen Sie dann das Blutstillungsmittel leicht und schneiden Sie mit einer Klinge das Gewebe zwischen den beiden Armen des Blutstillers auf.
- Identifizieren Sie den linken Leberlappen, um eine Stelle für die Tumorimplantation auszuwählen. Der linke Lappen ist inferolateral zum Mediallappen, der in der Mittellinie sitzt.
- Bevor Sie versuchen, die Leber aus dem Peritonealraum zu ziehen, legen Sie ein trockenes Stück Gaze auf die untere Seite des Schnitts.
Anmerkung: Die Gaze bietet eine haftende Oberfläche, auf die die Leber gelegt werden kann, um zu verhindern, dass sie sich in den Bauch zurückzieht.
- Ziehen Sie entweder mit einer atraumatischen Pinzette oder einem Stück feuchter Gaze über den Fingern vorsichtig den linken Leberlappen durch den Schnitt aus dem Bauch und legen Sie ihn auf die zuvor gelegte trockene Gaze. Siehe Abbildung 3.
Vorsicht: Die Leberkapsel ist empfindlich und kann leicht reißen. Es ist wichtig, beim Umgang mit diesem Organ vorsichtig zu sein, um Kapselblutungen, Leberblutungen und/oder ein eventuelles Hämoperitoneum zu vermeiden.
Anmerkung: Normalerweise erklärt sich die Leber visuell, wenn sie in den Peritonealraum eintritt; Ist der Magen des Kaninchens jedoch aufgebläht, kann die Leber kranial aus dem Blickfeld geschoben werden. Wenn dies der Fall ist, heben Sie die Bauchdecke vorsichtig mit einer stumpfen Sonde an. In diesem Szenario neigt die Leber aufgrund der Oberflächenspannung dazu, an der ventralen Seite des Zwerchfells zu haften, also trennen Sie die Leber vorsichtig mit einer stumpfen Sonde und sie sollte sich lösen. Verwenden Sie dann eine atraumatische Pinzette, um die Leber herauszuziehen.
- Bereiten Sie zu diesem Zeitpunkt das Tumorgewebe für die Implantation vor und legen Sie ein Stück feuchte Gaze über die Leber, um sie zu schützen.
- Wählen Sie ein 1 bis3 mm großes vorbehandeltes Tumorgewebe für die Implantation in die Leber aus. Siehe Abbildung 4.
- Mit einer #11-Klinge das Lebergewebe in einem 45°-Winkel durchstechen, so dass eine 0,5 cm tiefe Tasche entsteht, wobei darauf zu achten ist, dass es nicht in die dorsale Seite der Leberkapsel eindringt. Lassen Sie die Klinge nach der Punktion an Ort und Stelle. Siehe Abbildung 5.
- Heben Sie die Klinge vorsichtig in ventraler Richtung an, um eine kleine Tasche im Leberbett zu erzeugen. Entnehmen Sie das Tumorstück mit einer Pinzette, legen Sie das Tumorstück in diese Tasche und entfernen Sie dann die Klinge.
Anmerkung: Die Klinge kann vor dem Einsetzen des Tumorstücks entfernt werden, jedoch blutet die Leber und kann die Einstichstelle verdecken, was die Identifizierung erschwert.
Vorsicht: Achten Sie darauf, den Kontakt des Tumors mit anderen Strukturen zu minimieren, um eine unbeabsichtigte Tumoraussaat zu verhindern. Dies kann auch vermieden werden, indem alle Werkzeuge, die zur Unterstützung der anschließenden Implantation verwendet werden, beiseite gelegt werden.
- Platzieren Sie zu diesem Zeitpunkt ein Stück Blutstillungsmittel, wie z. B. Gelschaum, über die Tumortasche, um die Blutstillung zu fördern und das Ausstoßen des Tumorstücks zu verhindern.
- Bringen Sie die Leber wieder in den Bauch zurück, sobald die Blutstillung bestätigt ist.
- Die Bauchdecke mit einem 3-0 Polydioxanon-Naht auf einer Kegelnadel mit einem einfachen durchgehenden Stich verschließen und die Haut mit 4-0 Polyglactin 910 Nähten auf einer Schneidenadel mit einem durchgehenden Unterhautstich verschließen.
Vorsicht: Achten Sie beim Verschluss der Bauchdecke darauf, das Omentum oder andere Darmstrukturen bei einem Nahtwurf nicht zu beschädigen.
