Isolierung der porzinen Aorta: Ein chirurgischer Eingriff zur Entfernung der thorakalen Aorta von Miniaturschweinen für die nachgelagerte Analyse

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Zhao, Y., et al. Isolierung und Kultur von primären Aorten-Endothelzellen von Miniaturschweinen J. Vis. Exp. (2019)

In diesem Video demonstrieren wir ein Verfahren zur chirurgischen Entfernung der Aorta von Miniaturschweinen. Endothelzellen, die aus diesen isolierten Aorten entnommen werden, können unter In-vitro-Bedingungen weiter kultiviert werden, um die Gerinnung und Immunreaktionen zu untersuchen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Operation und Vorbereitung auf die Isolierung von Endothelzellen der Schweineaorta

Desinfektion des Operationssaals mit UV-Licht für 1 h und medizinisches Desinfektionsmittel 84 flüssig (verfügbarer Chlorgehalt beträgt 4,0 % - 5,0 %, Materialtabelle) vor der Durchführung der Operation.
Nachdem das Miniaturschwein eine intramuskuläre Injektion erhalten hat, die aus 15 mg/kg Ketamin, 15 mg/kg Xylazinhydrochlorid und 0,05 mg/kg Phenacetinhydrochlorid (Volumen: 100 μl/kg, Materialtabelle) (Abbildung 1A) besteht, bestätigen Sie den Anästhesiestatus des Tieres, indem Sie den schmerzhaften Reiz des Schweins (z. B. Einklemmen eines Ohrs oder Zittern einer Vordergliedmaße) und den physiologischen Index (z. B. Blutdruck, Herz- und Atemfrequenz).
Anmerkung: Eine weitere halbe Dosis kann dem Schwein verabreicht werden, wenn es Anzeichen des Aufwachens zeigt.
Schneiden Sie den Bauch mit einem Skalpell ein, legen Sie die untere Hohlvene frei und injizieren Sie anschließend Heparin-Natrium (5.000 E, Table of Materials) mit einer 5-ml-Spritze in die untere Hohlvene.
Fünf Minuten später wird ein Katheter in die Bauchschlagader mit Blut eingeführt, die Haut des Brustkorbs durchtrennt und das Zwerchfell mit einem Skalpell eingeschnitten und anschließend die linke Herzkammer abgeschnitten.
Anmerkung: Stellen Sie sicher, dass das Schwein eingeschläfert wird, indem Sie den Aortenpuls nach der Blutentnahme und dem Durchtrennen des Herzens überprüfen.
Die Rippen mit einer Knochenzange herausschneiden (Materialtabelle) und Herz und Lunge freilegen. Suchen Sie die Aorta hinter dem Herzen und der Lunge und klemmen Sie die beiden Enden ein. Waschen Sie die Aorta einmal mit vorgekühltem Waschpuffer - 1x PBS-Lösung (pH 7,4) mit 1% (v/v) Penicillin/Streptomycin. (Abbildung 1B,C).
Schneide die Aorta mit einer Schere aus und klemme die Aorta an jedem Ende fest. Entfernen Sie überschüssiges Gewebe um die Aorta herum mit einer sterilen Pinzette und Schere. Geben Sie die Aorta in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen, waschen Sie die Aorta 3x (30 mL pro Waschgang) mit vorgekühltem Waschpuffer und überführen Sie die Aorta ins Labor (Abbildung 1D).

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Der chirurgische Eingriff und die Exzision der Aorta eines Miniaturschweins. (A) Foto eines Miniaturschweins (Bama). (B) Die Aorta wird nach Laparotomie und Thorakotomie freigelegt. (C) Die Aorta wird an jedem Ende geklemmt. (D) Die Aorta wird in ein 50-ml-Röhrchen mit Kaltwaschpuffer gegeben.