Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Vorbereitung des Kaninchens auf die Operation
- Betäuben Sie das Kaninchen mit 20–40 mg/kg Ketamin und 2 mg/kg Midazolam durch subkutane Injektion. Setzen Sie das Kaninchen während der initialen Sedierung mit einer Maske auf 1,5 % bis 3 % Isofluran (typischerweise 2 %). Geben Sie eine Injektion von Alfaxalon zur Aufrechterhaltung der Anästhesie durch eine intramuskuläre Injektion von 3 mg/kg.
- Entfernen Sie nach der Betäubung die Maske und führen Sie einen Endotrachealtubus mit Manschette in die Atemwege ein und schließen Sie ihn an ein Beatmungsgerät an. Verabreichen Sie weiterhin Isofluran in einer Dosierung von 1,5 % bis 3 %.
- Entnehmen Sie Blut aus der zentralen Arterie aus beiden Ohren für ein chemisches Basispanel.
- Legen Sie einen 22-G-Ohrvenenkatheter in die laterale Ohrvene, damit die Laktat-Ringer-Lösung während des gesamten chirurgischen Eingriffs tropft. Alternativ kann normale Kochsalzlösung (0,9 % Natriumchlorid) verwendet werden.
- Legen Sie mit der Seitenvene im gegenüberliegenden Ohr einen Katheter in die Vene und verabreichen Sie Alfaxalon in einer Menge von 6 mg/kg/h. Erhöhen Sie den Alfaxalon allmählich auf 8 mg/kg/h, während Sie das Isofluran während der Vorbereitungsphase auf 0,6 % senken.
- Um die Schmerzen und das Infektionsrisiko zu begrenzen, verabreichen Sie Buprenorphin (0,01 mg/kg) und Enrofloxacin (5 mg/kg) durch subkutane Injektion mit einer 25-g-Nadel.
- Schneiden Sie die Haare am Hals, an der rechten und linken Innenseite der Oberschenkel und am Rücken mit einer Haarschneidemaschine (Klinge #40). Die Haare werden von der Rückseite entfernt, um den Kontakt mit dem Erdungspad aufrechtzuerhalten.
- Legen Sie eine Blutdruckmanschette an jedes der hinteren Gliedmaßen an und messen Sie den anfänglichen Blutdruck. Platzieren Sie die Manschette knapp unterhalb des Knies und die Sonde knapp über dem Sprunggelenk auf der Seitenfläche.
- Positionieren Sie das Kaninchen auf dem Operationstisch auf dem Rücken und schrubben und drapieren Sie die Operationsstellen. Dazu gehören der Hals für den Zugang zur Halsschlagader und der innere rechte Oberschenkel für den Zugang zur Oberschenkelarterie. Führen Sie das Sterilisationspeeling mit abwechselnden Peelings von 2 % Chlorhexidin und 70 % Ethylalkohol durch. Wiederholen Sie dies dreimal und sprühen Sie dann abschließend mit 2% iger Chlorhexidinlösung.
- Legen Sie eine 3 mm dicke Edelstahlkugel, die in einem Polyethylenbeutel niedriger Dichte sterilisiert wurde, auf das rechte (geschrubbte) Bein in der Nähe des oberen Teils des Oberschenkels, um als Größenreferenz bei Angiogrammmessungen zu dienen. Legen Sie bis zum Zeitpunkt der Operation ein steriles Tuch über das Bein. Lassen Sie die Kugel während des ersten Angiogramms in der sterilen Plastiktüte.
2. Angiographie
- Freilegung der rechten Arteria carotis communis
- Mache einen 4–5 cm langen Schnitt direkt seitlich der Luftröhre mit einem Skalpell mit einer #15 Klinge.
- Verwenden Sie eine stumpfe Dissektion, um die Halsschlagader freizulegen, und öffnen Sie den Schnitt mit kleinen Weitlaner-Retraktoren. Isolieren Sie die Halsschlagader vorsichtig von der Halsvene und dem Vagusnerv. Typischerweise werden für die stumpfe Dissektion eine gebogene Metzenbaumschere und ein gebogenes Mückenhämostat verwendet. Achten Sie darauf, dass die Halsschlagader vollständig vom Nerv und der Halsvene getrennt ist, damit die Ligaturen nur die Arterie ligieren.
- Platzieren Sie eine Ligatur mit einer 4-0-Seidennaht an den proximalen und distalen Enden der freiliegenden Arterie. Binden Sie das distale Ende der Halsschlagader mit einem Chirurgenknoten ab, gefolgt von vier quadratischen Knoten. Verwenden Sie am proximalen Ende einen Ligaloop, damit er je nach Bedarf festgezogen oder gelockert werden kann. Die Verwendung eines Ligaloops, der am proximalen Ende der freiliegenden Arterie platziert wird, kann helfen, den Einführapparat und den Katheter zu sichern.
- Verabreichen Sie 500 IE Heparin durch die IV. Verwenden Sie ca. 0,5 ml 1% Lidocain, das entlang der freiliegenden Halsschlagader aufgetragen wird, um das Gefäß zu erweitern. Eine Behandlung ist in der Regel ausreichend, kann aber bei Bedarf wiederholt werden. Schneiden Sie mit einem Skalpell oder einer Irisschere etwa die Hälfte der Halsschlagader durch und setzen Sie dann das 4-Zoll-Drahteinführwerkzeug in die Arterie ein.
- Führen Sie einen 0,014 Zoll x 185 cm großen Führungsdraht durch das Einführwerkzeug zur Aortenbifurkation am Beckenkamm in der absteigenden Aorta. Entfernen Sie das Einführwerkzeug und führen Sie einen 3F-Pigtail-Angiographiekatheter über den Draht ein.
- Schieben Sie den Pigtail-Katheter so vor, dass er 2 cm proximal zur Aortengabelung am Beckenkamm in der absteigenden Aorta ist.
- Positionieren Sie die Spitze des Katheters zwischen dem siebten Lendenwirbel und dem ersten Kreuzbeinwirbel. Testen Sie die Position des Katheters, indem Sie manuell 2–4 ml Kontrastmittel injizieren.
- Verabreichen Sie eine intraarterielle Injektion von 100 μg Nitroglycerin durch den Katheter, um die Vasodilatation zu erhöhen.
- Verabreichen Sie dem Kaninchen 0,8 ml 1% Lidocain durch den Katheter, um die Vasodilatation während des Angiogramms zu unterstützen. Befestigen Sie den Schlauch für den Injektor am Katheter und entfernen Sie alle Luftblasen in der Leitung. Injizieren Sie 8-9 ml Kontrastmittel mit einem automatisierten angiographischen Injektor durch den Katheter.
- Nehmen Sie serielle Bilder der Hintergliedmaßen mittels Angiographie auf.
- Stellen Sie den Power-Injektor auf einen Kontrast von 3 ml/s ein, also insgesamt 8-9 mL. Führen Sie eine digitale Subtraktionsangiographie mit 6 Bildern pro Sekunde durch.
- Wählen Sie die erstellten Serienbilder aus und ändern Sie ein Foto jedes Angiogramms mit einer Einstellung von ca. -40 %, um das Erscheinungsbild des Knochens zu minimieren und ein vollständiges Bild der Gefäßperfusion mit Kontrast aufzunehmen. Ein Beispielangiogramm des Gefäßflusses nach Ligatur/Exzision der Oberschenkelarterie ist in Abbildung 1 dargestellt.
