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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Erstellung von Knocheninfektionsmodellen
- Männliche neuseeländische weiße Kaninchen im Alter von 3 Monaten in Einzelkäfigen unter luftkontrollierten Bedingungen (20 ± 1 °C) und 12 h/12 h Hell-Dunkel-Beleuchtungszyklen halten. Bieten Sie täglich routinemäßige Diät und Leitungswasser an.
- Stellen Sie sicher, dass das Kaninchen zum Zeitpunkt der Operation mehr als 3 kg wiegt.
- Betäuben Sie Kaninchen durch intraperitoneale Injektion mit Pentobarbital-Natrium (3 mg pro 100 g Körpergewicht). Stellen Sie sicher, dass Kaninchen vollständig betäubt sind, wenn sie nicht auf ein Pfotenkneifen reagieren. Befestigen Sie Kaninchen während des Operationsvorgangs auf dem Operationstisch.
HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass die Dauer des Modellierungsverfahrens weniger als 1 h beträgt.
- Rasieren Sie die proximale Tibiaregion mit einem Elektrorasierer gegen die Haarwuchsrichtung. Desinfizieren Sie die Haut durch Auftragen einer Povidon-Jod-Lösung.
- Markieren Sie mit Stift und Lineal das obere Ende des Schienbeins und die Position des Bohrlochs für die Injektion mit S. aureus (der Abstand zum oberen Ende des Schienbeins beträgt 1,5 cm). Stellen Sie sicher, dass sich die Positionen der Bohrlöcher horizontal in der Mitte des Tibiaplateaus befinden (Abbildung 1A).
- Schneiden Sie die Tibiahaut mit einem Skalpell Nr. 11 und machen Sie einen 1 cm großen Schnitt in das Periost (Abbildung 1B, C). Stanzen Sie mit einem elektrischen Knochenbohrgerät ein Loch mit einem Durchmesser von 2 mm in die Tibia (Abbildung 1D).
- Drücken Sie die Löcher mit einem Durchmesser von 2 mm in das Tibiaplateau mit einem Zylinder aus Knochenwachs von 2 mm Durchmesser und 2 mm Höhe (Abbildung 1E). Entfernen Sie das überschüssige Knochenwachs entlang der horizontalen Ebene des Tibiaplateaus (Abbildung 1F). Prüfen Sie, ob das 2-mm-Loch mit Knochenwachs gefüllt ist (Abbildung 1G).
Anmerkung: Stellen Sie sicher, dass die Löcher mit Knochenwachs gefüllt sind, indem Sie das Loch mit oder ohne Blutüberlauf überprüfen.
- Nähen Sie das Periost und die Haut mit resorbierbarem chirurgischem Naht in einer vertikalen Matratzennaht zusammen, um zu verhindern, dass das Tier die Nähte kaut (Abbildung 1H).
- Injizieren Sie 1 x 108 KBE/ml S. aureus-Lösungen (30 μl pro 100 g Körpergewicht) mit einem 1 ml-Asepsis-Injektor (Abbildung 1I). Stellen Sie sicher, dass die Nadeln das Knochenwachs durchdringen und injizieren Sie die S. aureus-Lösung langsam in das Knochenmark.
- Halten Sie das Tier unter warmen und sauberen Bedingungen, um Wärmeverluste nach der Modellierung zu vermeiden. Überwachen Sie die Atemfrequenz und die Herzfrequenz. Nach dem Aufwachen halten Sie die Kaninchen in Einzelkäfigen mit freiem Zugang zu Futter und Wasser.
