Auftauen von Kaninchenembryonen: Ein Erwärmendes Verfahren zur Gewinnung kryokonservierter Kaninchenembryonen für den Embryotransfer

Zusammenfassung

Quelle: Garcia-Dominguez, X. et al., Minimalinvasiver Embryotransfer und Embryovitrifikation im optimalen Embryostadium im Kaninchenmodell. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt das Verfahren zum Auftauen von vitrifizierten Kaninchenembryonen und die vorsorglichen Messschritte für eine optimale Embryonenrückgewinnung.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Erwärmung der Embryonen

1. Tauen Sie die Embryonen in einem einzigen Schritt auf.
   1. Platzieren Sie das Ministraw horizontal 10 cm von flüssigem Stickstoffdampf entfernt für 20-30 s.
   2. Wenn der Kristallisationsprozess im Inneren des Ministrohs beginnt, tauchen Sie das Ministraw für 10-15 s in ein Wasserbad bei 25 °C.
   3. Entfernen Sie den Ministraw-Plug und schneiden Sie den Wattestopfen ab.
   4. Mit einem gekoppelten Mikrodispenser den gesamten Ministraw-Inhalt 5 Minuten lang in eine Platte mit 0,33 M Saccharoselösung bei 25 °C in BM ausstoßen.
      Anmerkung: Dieser Schritt muss schnell durchgeführt werden, um die Exposition des Embryos gegenüber der Vitrifikationslösung zu reduzieren.
   5. Bringen Sie die Embryonen für weitere 5 Minuten auf eine neue Platte mit BM-Lösung.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Flüssigstickstoff	Air Liquide	P1505XXX
Petrischale, 35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Kunststoff-Verband (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Kunststoff-Strohhalm 0,25 mL	IMV - Technologien	6431
Schere	ROBOZ	RS-5880	Jede normale kleine gerade Schere aus chirurgischem Stahl funktioniert.
Sterile Handschuhe	Alvet Escartí	Artikel-Nr.: 087GL010075
Steriles Kleid	Alvet Escartí	12261501
Sterile Maske	Alvet Escartí	058B15924B
Strohhalm-Stopfen	IMV - Technologien	6431
Saccharose	Sigma Aldrich	Nr. S7903
Wasserbad	RAYPA	BAE-4
Dulbeccos phosphatgepufferte Kochsalzlösung (DPBS)	Sigma Aldrich	Nr. D5773	Ohne Calciumchlorid.

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