Mikroinjektion von Mückenembryonen: Eine Technik zur Verabreichung exogener DNA in das Eigelb des Embryos von Anopheles gambiae, um Keimbahnmutationen zu erzeugen

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Carballar-Lejarazú, R. et al, Mikroinjektionsmethode für Anopheles gambiae Embryonen. J. Vis. (2021).

In diesem Video demonstrieren wir die Verabreichung des Gene-Drive-Konstrukts in den Embryo der Anopheles gambiae Mücke durch die Mikroinjektionstechnik des Embryos. Dieses Verfahren ermöglicht die Integration des gelieferten DNA-Konstrukts durch homologe Rekombination in die Keimbahnzellen, um eine transformierte Mückenpopulation zu erzeugen.

Protokoll

>1. Mikroinjektion von Embryonen

Verwenden Sie eine Mikroladerspitze, um die Nadeln mit 2 μl DNA-Gemisch (Plasmid-DNA in einer Konzentration von 300-400 ng/μl) zu füllen. Führen Sie die Nadel in den Nadelhalter ein und schließen Sie den Schlauch der automatischen Druckpumpe an (Abbildung 1).
Wichtig: Richten Sie die Nadel so aus, dass sie einen Winkel von 15° zur Ebene des Schlittens bildet (Abbildung 1).
Öffnen Sie die Nadelspitze, indem Sie vorsichtig das erste Ei der Anopheles gambiae-Mücke berühren, und injizieren Sie es, indem Sie die Spitze der Nadel ≤ 10 μm in den hintere....

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Nadelposition während der Mikroinjektionen. A) Weitwinkelansicht der Einspritzstufe. B,C) Positionieren Sie die Nadel so, dass die ausgerichteten Embryonen mit der Injektionsnadel einen Winkel von 15° bilden. Heben Sie den Arm des Mikroinjektionsinstruments, der die Nadel hält, nicht deutlich höher als den Mikroskoptisch an, um eine korrekte Winkelung zwischen der Nad.......