Methodenartikel

Lentivirale vektorbasierte Perivellin-Injektion: Eine Methode zur Transduktion des interessierenden Gens in befruchtete einzellige Maus-Eizellen

8. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Quelle: Dussaud, S. et al., Lentiviral vermittelte Produktion transgener Mäuse: Eine einfache und hocheffiziente Methode zur direkten Untersuchung von Gründern. J. Vis. Exp. (2018).

Dieses Video beschreibt die pronukleäre Injektion von lentiviralen Vektoren in den perivitellinen Raum eines befruchteten Mausembryos. Das Lentivirus enthält das Transgen, das in das Genom des befruchteten Embryos eingebaut wird und schließlich transgene Mäuse hervorbringt.

Protokoll

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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Entferne Kumuluszellen aus befruchteten Eizellen.

  1. Verwenden Sie unter einem Stereomikroskop 2 Insulinspritzen: die erste, um den Eileiter zu halten, und die zweite, um die Ampulle aufzureißen und befruchtete Eizellen in die Hyaluronidase-Arbeitslösung zu verteilen.
  2. Nehmen Sie die vorbereitete Glaspipette zum Sammeln von Eiern und schließen Sie sie an den Schlauch und einen am Mundstück montierten 0,22-μm-Filter an, um alle Eier abzusau....

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Vorbereitung der Mikroinjektionspipetten und Genotypisierung.
(ein) Schematische Zeichnungen von Mikroinjektionspipetten, um die Hauptunterschiede zwischen Pipetten hervorzuheben, die für DNA- oder lentivirale Vektorinjektionen verwendet werden. Linkes Bild: Die Gesamtform beider Pipettentypen ist gezeichnet. Der gestrichelte Kreis markiert den ve.......

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Offenlegungen

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Insulin-Spritze VWR Tel.: 613-3867Terumo Myjector
Aspirator-Röhrchenbaugruppen für kalibrierte Mikrokapillarpipetten SigmaNr. A5177-5EA
Hyaluronidase Enzym 30mg SigmaNr. H4272 Mausembryo getestet
Kapillaren aus Borosilikatglas Harvard-ApparaturGC 100-10
Inverses Mikroskop Nikon Übernehmer NK2 5188Hoffman-Modulationskontrastbeleuchtung ist erforderlich
Mikromanipulator Eppendorf Celltram Luft

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Schlagwörter

Transgene M useZona pellucidaHyaluronidase BehandlungMikroinjektionsnadelvirale TransduktionPronukleus StadiumEmbryokultur

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