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1. Die Kapselmethode zur Inaktivierung im Biocontainment mit 2% Glutaraldehyd, gefolgt von negativer Färbung in einem BSL-2-Labor
- Verfahren zur Inaktivierung von Viren.
- Mischen Sie die Virussuspension im Biocontainment BSC gut mit dem gleichen Volumen von 4 % Glutaraldehyd, um eine Endkonzentration von 2 % Glutaraldehyd zu erreichen.
Vorsicht: Glutaraldehyd ist eine gefährliche Chemikalie und erfordert einen angemessenen Schutz. Glutaraldehyd kann für kurze Zeiträume in einem normalen BSC verwendet werden, aber ein Reagenz mit erweitertem offenem Reagenz erfordert die Arbeit in einem kanalisierten BSC oder einem chemischen Abzug.
- Inaktivieren Sie die Viren mindestens 24 Stunden lang mit Fixiermittel, bevor Sie sie verpacken, dekontaminieren und an die BSL-2 EM-Anlage übergeben.
- Aspirieren Sie in der BSL-2 EM-Anlage das Virus und das Fixiermittelgemisch in die Kapsel, die zwei TEM-Gitter enthält, die an einer Pipette befestigt sind.
- Platzieren Sie die Pipette 10 Minuten lang waagerecht, wobei die Gitter horizontal ausgerichtet sind.
Anmerkung: Dies soll eine gleichmäßige Verteilung der Viruspartikel auf den TEM-Gittern fördern.
- Nehmen Sie die Pipette auf und drücken Sie den Kolben, um das Virus in einen Abfallbehälter auszustoßen. Aspirieren Sie 40 μl dI-Wasser in die Kapseln und geben Sie es für 3 Spülgänge in den Abfallbehälter.
- Aspirieren Sie 40 μl entweder 1 % Uranylacetat (UA) oder 1 % Kaliumphosphotungssäure (PTA) in die Kapseln für 30 s.
Anmerkung: Die Färbezeit variierte je nach Virusprobe zwischen 10 s und 1 min.
Vorsicht: UA ist ein Alpha-Strahler und ein kumulatives Toxin. Behandeln Sie es mit angemessenem Schutz.
- Nehmen Sie die Kapsel aus der Pipette und tupfen Sie die Gitter trocken, indem Sie den Rand der Gitter mit einem Stück Filterpapier berühren. Trocknen Sie die Gitter an der Luft und lagern Sie sie für die anschließende TEM-Bildgebung.