Safranin-O-Färbung: Eine Methode zur Visualisierung der strukturellen Integrität und Zellularität von Knorpel

Abstract

Quelle: Zhao, Y., et al. Etablierung eines chirurgisch induzierten Modells bei Mäusen zur Untersuchung der schützenden Rolle von Progranulin bei Osteoarthritis. J. Vis. Exp. (2014).

In diesem Video demonstrieren wir ein Färbeverfahren für Knorpel mit Safranin-Orange. Diese Methode hilft, den Knorpel sichtbar zu machen und eventuelle Schäden zu erkennen.

Protocol

1. Safranin O Färbung

1. Beginnen Sie mit den Objektträgern mit seriellen sagittalen Schnitten, die eine Region von der Mitte des lateralen Kondylus bis zur Mitte des medialen Kondylus eines euthanasierten Mausmodells mit dem destabilisierten medialen Meniskus überspannen.
2. Als nächstes entparaffinisieren Sie die Objektträger in Oxylen und hydratisieren sie in einem Ethanolgradienten zu destilliertem Wasser. Danach werden die Objektträger durch Weigerts Eisen-Hämatoxylin-Lösung, 0,05 % Fast Green (FCF)-Lösung, 1 % Essigsäurelösung und 0,1 % Safranin-O-Lösung gefärbt. Montieren Sie die Objektträger mit harzigem Medium.
3. Bewerten Sie die Safranin O-gefärbten Objektträger basierend auf dem Verlust des Proteoglykans (rote Farbe) im Knorpel und dem Prozentsatz der Zerstörung in der Knorpelstruktur, führen Sie eine statistische Analyse für den histologischen Score durch.